一、阿魏酸钠对心肌缺血/再灌注损伤在体大鼠心功能的作用（论文文献综述）
宋欣丽[1]（2021）在《龙牙楤木总皂苷抗MIRI机制研究及中成药防治MIRI的系统评价》文中进行了进一步梳理研究目的1.通过建立大鼠心肌缺血再灌注损伤模型,观察龙牙楤木总皂苷对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用;并且探讨其保护作用是否与线粒体功能障碍以及内质网应激有关。2.通过Meta分析方法对中成药治疗心肌缺血再灌注损伤疗效进行系统评价,为临床使用中成药治疗心肌缺血再灌注损伤治疗提供循证医学依据。研究方法1.实验研究:采用随机数字表法将Wistar大鼠随机分为5组,分别为假手术组、模型组、龙牙楤木总皂苷低、中、高剂量组,通过结扎左前降支30min后复灌,构建大鼠在体心肌缺血再灌注损伤模型,假手术组、模型组予生理盐水灌胃,龙牙楤木总皂苷剂量组分别按50、100、200mg/（kg·d）灌胃处理。2,3,5—氯化三苯基四氮唑（2,3,5-triphenyltetrazolium chloride,TTC）染色法测定大鼠心肌梗死面积,酶联免疫法检测各组大鼠肌酸激酶同工酶（CK-MB）、肌钙蛋白T（cTnT）的含量,TUNEL（TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling）染色法观察心肌组织细胞凋亡指数;使用透射电镜观察心肌组织中线粒体结构和形态变化,提取各组大鼠心肌组织线粒体,活性氧荧光（DCFH-DA）探针法观察线粒体活性氧簇（Reactive Oxygen Species,ROS）的生成变化、JC-1荧光探针法观察线粒体膜电位变化、比色法观察腺嘌呤核苷三磷酸（Adenosine Triphosphate,ATP）的形成及琥珀酸脱氢酶（Succinate dehydrogenase,SDH）活性变化情况。免疫组织化学检测法、蛋白质印迹法（Western blot）法检测内质网经典信号通路PERK-eIF2α通路中蛋白激酶R样内质网激酶（proteinkinase R-like ER kinase,PERK）、p-蛋白激酶R 样内质网激酶（p-protein kinase R-like ER kinase,p-PERK）、真核起始因子 2（eukaryotic initiation factor 2,eIF2α）、p-真核起始因子 2（p-eukaryotic initiation factor 2,p-eIF2α）相关蛋白的表达,实时荧光定量PCR（qRT-PCR）法检测PERK、eIF2α中mRNA的含量。2.临床研究:通过全面搜索并筛选数据库中自建库到2021年1月1日以来发表的关于中成药治疗心肌缺血再灌注损伤患者的随机临床对照试验,对相关结局指标利用RevMan5.3软件进行系统评价。评价指标包括心肌损伤标志物:肌酸激酶（CK）、肌酸激酶同工酶（CK-MB）、肌钙蛋白I（cTNI）、肌钙蛋白T（cTNT）、再灌注心律失常发生率、不良事件发生率、左室射血分数（LVEF）、高敏C-反应蛋白（hs-CRP）、丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、一氧化氮（NO）、乳酸脱氢酶（LDH）等。研究结果实验研究:实验一:TTC染色结果显示,sham组、I/R组、龙牙楤木总皂苷低、中、高剂量组心肌梗死面积占总心肌面积百分比分别为:0%、72%、56%、52%、31%。其中,与sham组相比较,I/R组、龙牙楤木总皂苷低、中、高组心肌梗死面积所占比例明显增加,I/R组差异具有显着统计学意义（P<0.01）,龙牙楤木总皂苷低、中、高剂量组提示差异不具有统计学意义（P>0.05,P>0.05,P>0.05）;龙牙楤木总皂苷各剂量组和I/R组相比较,从各组心肌梗死面积所占百分比可见,龙牙楤木总皂苷各组梗死面积比值均低于I/R组,并且随着龙牙楤木总皂苷剂量的增加,心肌梗死面积所占比值逐渐降低,统计学分析显示,龙牙楤木总皂苷低剂量组统计结果显示无统计学差异（P>0.05）;龙牙楤木总皂苷中剂量组结果显示具有统计学意义（P<0.05）,而龙牙楤木总皂苷高剂量组结果提示具有显着统计学意义（P<0.01）。TUNEL染色结果显示,从颜色上看,sham组:大部分心肌细胞的细胞核呈现为蓝色;I/R组:大部分心肌细胞的细胞核呈现为黄褐色;龙牙楤木总皂苷低、中、高剂量黄褐色细胞核所占比例介于sham组和I/R组之间,但呈逐渐减少的趋势。sham组细胞凋亡很不明显,可见存在少量散在凋亡细胞;具体的凋亡细胞百分比见下表。与sham组比较,I/R组、龙牙楤木总皂苷低、中、高剂量组大鼠心肌细胞凋亡百分比则明显增加,阳性凋亡细胞数明显升高,统计学分析结果显示,I/R组差异具有显着统计学意义（P<0.01）,龙牙楤木总皂苷低、中、高剂量组提示差异不具有统计学意义（P>0.05,P>0.05,P>0.05）;与I/R组相比,龙牙楤木总皂苷低剂量组差异具有统计学意义（P<0.05）,中、高剂量组差异具有显着统计学意义（P<0.01,P<0.01）。酶联免疫法结果显示,和sham组进行比较,I/R组、龙牙楤木总皂苷低、中、高CK-MB、cTnT含量,均有所显着升高,统计分析结果显示,I/R组差异具有显着统计学意义（P<0.01、P<0.01）,龙牙楤木总皂苷低、中、高剂量组差异不具有统计学意义（P>0.05,P>0.05,P>0.05;P>0.05,P>0.05,P>0.05）;与I/R组相比,龙牙楤木总皂苷低剂量组差异无明显统计学意义（P>0.05;P>0.05）,龙牙楤木总皂苷中剂量组差异具有统计学意义（P<0.05;P<0.05）,龙牙楤木总皂苷高剂量组差异具有显着统计学意义（P<0.01;P<0.01）。实验二:透射电镜结果显示:sham组心肌细胞大小及形态基本规则,肌原纤维排列规则;肌细胞内线粒体丰富,线粒体结构完整、形态规则,线粒体内脊排列密集、结构清晰。I/R组心肌细胞大小及形态有较大差异,可见萎缩及坏死肌细胞,肌原纤维排列紊乱;肌细胞内线粒体分布不均,部分聚集,线粒体大小及形态有较大差异,内脊大多模糊。龙牙楤木总皂苷低剂量组心肌细胞形态有一定差异,肌原纤维排列不规则;肌细胞内线粒体丰富,线粒体肿胀,内脊扩张、大多结构模糊;中剂量组心肌细胞大小及形态稍不规则,细胞核呈长梭形,肌原纤维排列稍不规则;肌细胞内线粒体丰富,线粒体结构完整、形态规则,线粒体内脊部分结构清晰、部分模糊;高剂量组心肌细胞大小及形态基本规则,肌原纤维排列规则;肌细胞内线粒体丰富,线粒体结构完整、形态规则,线粒体内脊排列密集、结构清晰。DCFH-DA探针法检测ROS水平结果显示,和sham组进行比较,I/R组、龙牙楤木总皂苷低、中、高ROS水平均显着升高,统计分析结果显示,I/R组差异具有显着统计学意义（P<0.01）,龙牙楤木总皂苷低、中、高剂量组差异不具有统计学意义（P>0.05,P>0.05,P>0.05）;与I/R组相比,随着龙牙楤木总皂苷剂量的增高,ROS水平呈现出逐步走低的趋势;统计分析结果显示,龙牙楤木总皂苷低、中、高剂量组差异均具有显着统计学意义（P<0.01,P<0.01,P<0.01）。比色法观察ATP水平结果显示,和sham组进行比较,I/R组、龙牙楤木总皂苷低、中、高ATP水平均有所降低,统计分析结果显示,I/R组差异具有显着统计学意义（P<0.01）,龙牙楤木总皂苷低、中、高剂量组差异不具有统计学意义（P>0.05,P>0.05,P>0.05）;与I/R组相比,随着龙牙楤木总皂苷剂量的增高,ATP水平呈现出逐步增高的趋势;统计分析结果显示,龙牙楤木总皂苷低、中、高剂量组差异均具有显着统计学意义（P<0.01,P<0.01,P<0.01）;JC-1荧光探针法观察线粒体膜电位水平结果显示,和sham组进行比较,I/R组、龙牙楤木总皂苷低、中、高线粒体膜电位水平水平均有所降低,统计分析结果显示,I/R组差异具有显着统计学意义（P<0.01）,龙牙楤木总皂苷低、中、高剂量组差异不具有统计学意义（P>0.05,P>0.05,P>0.05）;与I/R组相比,随着龙牙楤木总皂苷剂量的增高,线粒体膜电位水平水平呈现出逐步增高的趋势;统计分析结果显示,龙牙楤木总皂苷低、中、高剂量组差异均具有显着统计学意义（P<0.01,P<0.01,P<0.01）;比色法观察SDH活性水平结果显示,和sham组进行比较,I/R组、龙牙楤木总皂苷低、中、高SDH活性水平均有所升高,统计分析结果显示,I/R组差异具有显着统计学意义（P<0.01）,龙牙楤木总皂苷低、中、高剂量组差异不具有统计学意义（P>0.05,P>0.05,P>0.05）;与I/R组相比,随着龙牙楤木总皂苷剂量的增高,SDH活性水平呈现出逐步走低的趋势;统计分析结果显示,龙牙楤木总皂苷低、中、高剂量组差异均具有显着统计学意义（P<0.01,P<0.01,P<0.01）。实验三:Western blot方法检测心肌组织中PERK、eIF2α的表达。结果显示:与sham组相比,I/R组、龙牙楤木总皂苷低、中、高剂量组PERK、eIF2α的表达没有明显变化,统计学分析结果显示,差异均不具有统计学意义（P>0.05,P>0.05,P>0.05,P>0.05;P>0.05,P>0.05,P>0.05,P>0.05）。而与I/R组相比较,龙牙楤木总皂苷低、中、高剂量组PERK的表达也没有明显改变,统计学分析显示,差异也不具有统计学意义（P>0.05,P>0.05,P>0.05,P>0.05;P>0.05,P>0.05,P>0.05,P>0.05）。Western blot方法检测心肌组织中p-PERK、p-eIF2α的表达结果显示,和sham组进行比较,I/R组、龙牙楤木总皂苷低、中、高p-PERK、p-eIF2α表达水平均显着升高,统计分析结果显示,I/R组差异具有显着统计学意义（P<0.01、P<0.01）,龙牙楤木总皂苷低、中、高剂量组差异不具有统计学意义（P>0.05,P>0.05,P>0.05）;与I/R组相比,随着龙牙楤木总皂苷剂量的增高,p-PERK、p-eIF2α表达水平呈现出逐步走低的趋势;统计分析结果显示,龙牙楤木总皂苷低、中、高剂量组差异均具有显着统计学意义（P<0.01,P<0.01,P<0.01;P<0.01,P<0.01,P<0.01）。qRT-PCR 方法检测心肌组织中PERK、eIF2αmRNA的表达,结果显示,和sham组进行比较,I/R组、龙牙楤木总皂苷低、中、高PERK、eIF2α表达水平均显着升高,统计分析结果显示,I/R组差异具有显着统计学意义（P<0.01;P<0.01）,龙牙楤木总皂苷低、中、高剂量组差异不具有统计学意义（P>0.05,P>0.05,P>0.05;P>0.05,P>0.05,P>0.05）;与I/R组相比,随着龙牙楤木总皂苷剂量的增高,PERK、eIF2α表达水平呈现出逐步走低的趋势;统计分析结果显示,龙牙楤木总皂苷低、中、高剂量组差异均具有显着统计学意义（P<0.01,P<0.01,P<0.01;P<0.01,P<0.01,P<0.01）。免疫组化结果显示:与 sham组相比,I/R组、龙牙楤木总皂苷低、中、高剂量组PERK、eIF2α的表达没有明显改变,统计学分析结果显示,差异均不具有统计学意义（P>0.05,P>0.05,P>0.05,P>0.05;P>0.05,P>0.05,P>0.05,P>0.05）。而与I/R组相比较,龙牙楤木总皂苷低、中、高剂量组PERK、eIF2α的表达也没有太大差异,统计学分析显示,差异也不具有统计学意义（P>0.05,P>0.05,P>0.05;P>0.05,P>0.05,P>0.05）。免疫组化方法检测心肌组织中p-PERK的表达。结果显示,和sham组进行比较,I/R组、龙牙楤木总皂苷低、中、高p-PERK表达水平均显着升高,I/R组差异具有显着统计学意义（P<0.01）,龙牙楤木总皂苷低、中、高剂量组差异不具有统计学意义（P>0.05,P>0.05,P>0.05）;与I/R组相比,随着龙牙楤木总皂苷剂量的增高,p-PERK表达水平呈现出逐步走低的趋势;统计分析结果显示,龙牙楤木总皂苷低、中、高剂量组差异均具有显着统计学意义（P<0.01,P<0.01,P<0.01）。免疫组化方法检测心肌组织中p-eIF2α的表达。结果显示,和sham组进行比较,I/R组、龙牙楤木总皂苷低、中、高p-eIF2α表达水平均显着升高,统计分析结果显示,I/R组差异具有统计学意义（P<0.05）,龙牙楤木总皂苷低、中、高剂量组差异不具有统计学意义（P>0.05,P>0.05,P>0.05）;与I/R组相比,随着龙牙楤木总皂苷剂量的增高,p-eIF2α表达水平呈现出逐步走低的趋势;统计分析结果显示,龙牙楤木总皂苷中、高剂量组差异均具有统计学意义（P<0.05,P<0.05）,龙牙楤木总皂苷低剂量组差异不具有统计学意义（P>0.05）。临床研究:最终纳入研究96项,中文文献92篇,英文文献4篇。Meta分析结果显示:CK-MB（SMD:-1.86,95%CI:[-2.33,-1.38],I2=95%,P<0.00001）;CK（SMD:-102.21,95%CI:[-129.34,-75.09],I2=100%,P<0.00001）;cTnI（SMD:-0.80,95%CI:[-0.97,-0.62],I2=99%,P<0.00001）,cTnT（SMD:-1.55,95%CI:[-1.8,-1.3],I2=100%,P<0.00001）;再灌注心律失常发生率（MD:-0.42,95%CI:[-0.34,-0.51],I2=45%,P<0.00001）;不良事件发生率（MD:-0.28,95%CI:[-0.22,-0.36],I2=12%,P<0.00001）;LVEF（SMD:-4.89,95%CI:[-3.9,-5.87],I2=86%,P<0.00001）;HsCRP（SMD:-5.04,95%CI:[-6.92,-3.16],I2=99%,P<0.00001）;MDA（SMD:-4.25,95%CI:[-5.22,-3.28],I2=99%,P<0.00001）;SOD（SMD:-15.26,95%CI:[-10.74,-19.78],I2=99%,P<0.00001）;NO（SMD:-15.26,95%CI:[-5.29,-7.51],I2=97%,P<0.00001）;LDH（MD:-13.83,95%CI:[-20.31,-7.35],I2=0%,P<0.00001）。研究结论1.龙牙楤木总皂苷对大鼠心肌缺血再灌注损伤具有一定的保护作用,可减少心肌酶漏出,抑制心肌细胞凋亡,改善损伤心肌组织和线粒体结构,抑制SDH活性,同时降低ROS生成,减缓蛋白磷酸化,其机制可能与降低线粒体功能障碍、抑制内质网应激的过度激活有关。龙牙楤木总皂苷的保护作用与剂量呈正相关,发挥大鼠抗心肌缺血再灌注损伤作用的最适有效剂量在200mg/（kg·d）左右。2.中成药联合西医常规治疗心肌缺血再灌注损伤疗效肯定,尤其在降低再灌注性心律失常和不良事件发生率方面效果显着,但鉴于纳入研究数量偏少、样本量较小、方法学质量偏低,未来需要更多高质量的随机对照试验来证实。
张博伦,王丽,胡雅光,林富,卢德永[2]（2021）在《阿魏酸钠通过ERK信号通路干预大鼠心肌缺血再灌注损伤的实验研究》文中进行了进一步梳理目的探讨阿魏酸钠（SF）预处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤（MIRI）的保护作用机制。方法将大鼠随机分为假手术组（Sham组）、模型组（MI/R组）、阿魏酸钠组（SF组）、抑制剂组（In组）,每组10只。造模前2周,分别给予SF组SF 40 mg/kg、In组SF 40 mg/kg+U0126 10μmol/L、Sham组、MI/R组注射等容积生理盐水。造模完成后分别检测心肌组织血管内皮生长因子（VEGF）蛋白、p-ERK1/2蛋白、微血管密度（MVD）,采用NBT法测定大鼠心肌组织梗死面积,并观察心肌病理形态学改变。结果与MI/R组比较,SF组VEGF蛋白、MVD、p-ERK1/2信号通道蛋白增加（P<0.05）。SF组大鼠心肌组织梗死面积减少（P<0.05）。苏木精-伊红染色显示,SF组的病理结构损伤减轻。结论 SF可以通过ERK1/2信号通路上调VEGF蛋白,进而增加微血管生成,起到保护大鼠MIRI的作用。
马嘉鑫[3]（2021）在《葛根与粉葛抗MIRI所致心律失常的疗效与机制研究》文中提出目的:观察葛根（PLR）与粉葛（PTR）对缺血/再灌注（I/R）损伤大鼠心律失常的影响,PLR和PTR含药肠吸收液（IAF）和含药血清（MS）对氧-糖剥夺/复氧（OGD/R）损伤H9c2细胞的影响,经系统药理学方法和分子对接技术探讨二者抗心律失常的疗效差异及其可能的作用机制。方法:（1）SD适应性饲养1周后分组,每组15只,连续灌胃给予相应药物15d:普萘洛尔组（Propranolol,Pro,15mg/kg/d）,PLR低、中、高组（PLRL=1.6、PLRM=3.2、PLRH=6.4g/kg/d）,PTR低、中、高组（PTRL=1.6、PTRM=3.2、PTRH=6.4g/kg/d）,假手术组（Sham）、模型组（I/R）每日灌胃等体积生理盐水。末次给药1h后监测Ⅱ导联心电图,采用结扎冠状动脉左前降支（Left anterior descending,LAD）缺血15min,再灌注30min方法建立缺血/再灌注模型,全程记录ECG。再灌注结束后,每组随机选取6只动物用伊文斯兰染色法确认心脏缺血区面积。ECG结束后每组随机选取8只动物腹主动脉取血检测SOD、MDA、CK-MB、GSH-Px、TNF-α和IL-6。并立即移取心脏,清洗干净后每组随机选取8个用于计算心肌肥厚指数,随后将心肌组织保存在-80℃,用于左心室心肌组织c Tn T含量、Na+-K+-ATPase和Ca2+-ATPase活性检测。每组随机选4只动物取相同部位部分左心室心肌组织用4%多聚甲醛固定,用于HE、Masson染色、TUNEL检测和免疫组化检测;每组随机选6只动物取相同部位左心室心肌组织用于Western Blot检测MAPK p38和NFκB p65蛋白表达;（2）用Q-TOF检测鉴定PLR和PTR的IAF和MS中的有效成分,用Pro、2.5%、5%、7.5%的IAF或MS和葛根素（Puerarin,Pue）干预H9c2细胞,通过建立OGD/R损伤模型,检测H9c2细胞活力和细胞内SOD活性和LDH活性,用Western Blot检测心肌细胞MAPK p38和NFκB p65蛋白表达;（3）通过系统药理学方法和分子对接技术,将在TCMSP和化学数据库获得的葛根有效成分及其靶点与Gene Cards和OMIM数据库中心律失常相关的靶点进行交叉,将共有靶点通过GO和KEGG分析获取它们在生物体内的生物学过程及参与其中的通路。最后选择优先度和关联度较高的活性成分与MAPK p38和NFκB p65蛋白进行分子对接,分析这些成分与蛋白之间的结合方式与特点,探究葛根抗心律失常的潜在机制。结果:（1）心电图参数:与Sham相比,大鼠经I/R处理后,心电图参数异常,表现为频发的室性期前收缩、联律、室性心动过速、室颤等（P<0.05）,综合所有心律失常评分显着高于Sham（P<0.05）。与I/R组相比,PLRL、PLRM和PTRL可改善I/R大鼠心电图参数异常,降低心律失常评分（P<0.05）,所有治疗组都可缩短心律失常的持续时间（P<0.01）,降低大鼠VT和VF的发生率;相同剂量的PLR和PTR相比,PLRL组的paired VPC发生次数少于PTRL（P<0.05）,PLRM组二联律、三联律次数和心律失常评分低于PTRM（P<0.01）;心肌肥厚指数与缺血区面积:与Sham相比,I/R处理对大鼠心肌肥厚指数并无明显影响（P>0.05）,所有给药组与I/R组无统计学差异（P>0.05）;与Sham相比,I/R大鼠心肌缺血区面积显着增加（P<0.01）,所有药物预处理组均减少了大鼠缺血区面积（P<0.01）;Elisa试剂盒检测:与Sham相比,I/R可降低大鼠血清SOD、GSH-Px活性、升高MDA、TNF-α含量和CK-MB活性（P<0.01）,PLR和PTR可以不同程度调节这些心肌酶的活性和炎症因子含量（P<0.05）;I/R可降低大鼠心脏Na+-K+-ATPase和Ca2+-ATPase活性降低（P<0.01）,c Tn T含量升高（P<0.01）,对比I/R组,药物预处理组Pro、PLRL、PLRM、PTRL、PTRM提高Na+-K+-ATPase活性（P<0.01）,Pro和PLRM升高Ca2+-ATPase活性（P<0.01）,Pro、PLRL、PLRM能降低I/R处理大鼠心脏c Tn T含量（P<0.01）,PTR组Ca2+-ATPase活性和c Tn T含量与I/R组相比无统计学差异（P>0.05）;此外,PLRL组TNF-α含量低于PTRL（P<0.05）;PLRH组GSH-Px活性高于PTRH组（P<0.05）;PLRM和PLRH组CK-MB活性分别低于PTRM和PTRH（P<0.05）。PLRL和PLRM组c Tn T含量分别低于PTRL和PTRM（P<0.05）;病理变化:与Sham相比,I/R大鼠表现出心肌细胞纤维肿胀、炎性细胞浸润、排列紊乱、细胞间质胶原沉积。药物预处理组不同程度改善了这些变化,Pro、PLRM、PTRH（P<0.01）和PLRL、PLRH、PTRM（P<0.05）减少了大鼠心肌间质胶原体积;Pro、PLRM、PLRH和PLRL（P<0.01）及PTRL（P<0.05）降低了心肌细胞凋亡指数;PLRL和PLRM组凋亡细胞分别少于PTRL和PTRM（P<0.05）;免疫组化:I/R组大鼠心肌细胞缝隙连接蛋白Cx43阳性表达明显增加（P<0.01）,药物预处理组可不同程度增加Cx43表达,其中Pro和PLRM组（P<0.01）及PLRL（P<0.05）Cx43阳性表达较I/R组增强,其余组与I/R相比无统计学差异;PLRL组和PLRM组Cx43表达分别高于PTRL和PTRM（P<0.05）;Western Blot:与Sham相比,I/R大鼠心脏MAPK p38和NFκB p65蛋白相对表达明显增加（P<0.01）;与I/R相比,Pro、PLRL、PLRM、PLRH、PTRH（P<0.01）及PTRM（P<0.05）可抑制MAPK p38蛋白表达,所有给药组NFκB p65蛋白相对表达明显减少（P<0.01 vs I/R）;PLRL和PLRH组NFκB p65蛋白相对表达分别低于PTRL和PTRH（P<0.05）。（2）Q-TOF检测:通过Q-TOF检测鉴定出PLR和PTR的IAF和MS含有Pue、大豆苷、3’-甲氧基葛根素、大豆素、芒柄花苷、滨蒿内酯、芒柄花素、染料木素。细胞活力:经OGD/R处理后,H9c2细胞活力比Normal组显着降低（P<0.01）,Pro、IAF、MS和Pue组H9c2细胞的活力较OGD/R组有不同程度增加（P<0.01）,PLR的三个浓度IAF和MS组的细胞存活率均高于同浓度的PTR（P<0.05）;SOD和LDH活性:与Normal组比较,OGD/R组SOD活性明显降低（P<0.01）,LDH活性明显升高（P<0.01）;与OGD/R比较,Pro、Pue以及PLR和PTR的IAF和MS均可以升高H9c2细胞SOD活性（P<0.01）,PLR组的SOD活性高于PTR组;Pro、Pue以及PLR和PTR的IAF和MS均可以降低H9c2细胞LDH活性（P<0.01）;PLR的三个浓度的IAF组的SOD活性均高于同浓度的PTR（P<0.05）,2.5%PLR和5%PLR的MS组的SOD活性高于同浓度的PTR（P<0.05）;2.5%PLR和5%PLR组在IAF处理后,LDH活性低于同浓度的PTR（P<0.05）;Western Blot:OGD/R组H9c2细胞MAPK p38和NFκB p65蛋白表达比Normal组明显增加（P<0.05）,不同浓度PLR、PTR的IAF和MS可不同程度抑制MAPK p38和NFκB p65蛋白表达（P<0.05）,PTR-MS组NFκB p65蛋白表达与OGD/R组无统计学差异（P>0.05）。IAF和MS比较:IAF处理的H9c2细胞存活率高于MS处理组（P<0.01）,IAF组SOD活性高于MS组（P<0.01）,IAF处理组LDH活性低于MS处理组（P<0.05）,IAF和MS处理的H9c2细胞MAPK p38蛋白相对表达无统计学差异（P>0.05）,IAF组NFκB p65蛋白相对表达低于MS组（P<0.01）。（3）分析得到葛根中有12种活性成分干预135个与心律失常有关的基因发挥抗心律失常的作用,将这些映射到268条KEGG通路中,主要包含PI3K-Akt、MAPK、Fox O、TNF、IL-17、HIF-1、c AMP、C-type lectin receptor、Toll-like receptor、Ras、p53、NFκB、VEGF信号通路。将关联度最高的5种成分与MAPK14和NFκB3蛋白进行分子对接打分,发现它们通过氢键或π-π共轭的形式结合。结论:（1）PLR与PTR对MIRI及再灌注心律失常有不同程度保护作用,PLR抗再灌注损伤及心律失常的效果优于同剂量的PTR;（2）PLR与PTR的IAF和MS可以不同程度的保护OGD/R对H9c2细胞的损伤,PLR的IAF和MS保护OGD/R对H9c2细胞的损伤优于同浓度的PTR的IAF和MS;（3）IAF避免了多种外源和内源性成分的干扰,比MS更适合于中药体外药理学研究;（4）PLR与PTR可能是通过大豆素、葛根素、染料木素、芒柄花素和滨蒿内酯等成分作用于MAPK p38/NFκB p65信号通路发挥抗缺血/再灌注抗心律失常的作用,从而保护缺血心肌免受再灌注损伤。
文超[4]（2021）在《三七三醇皂苷抗心肌缺血再灌注损伤机制研究及三七总皂苷对PCI心肌保护作用的系统评价》文中研究表明研究目的1.实验部分通过Langendorff实验装置,建立大鼠离体心脏的缺血再灌注损伤模型,并观察三七三醇皂苷对大鼠心脏缺血再灌注损伤造成的影响,同时探究其是否通过PI3K/Akt信号通路及其相关的机制发挥作用。2.临床部分采用Meta分析研究方法,系统评价三七总皂苷治疗急性冠脉综合征患者经PCI后心肌缺血再灌注损伤的疗效及安全性,旨在提供进一步的循证医学证据。研究方法1.实验部分实验一:将40只健康雄性Wistar大鼠采用随机数字表法,随机分为对照组、I/R模型组和低、中、高剂量三七三醇皂苷组（PTSL组、PTSM组、PTSH组）,各8只。对照组穿线,但不结扎冠状动脉,以K-H液持续灌流105min;IR模型组穿线并结扎冠状动脉左前降支近分支30 min后松开结扎线,以K-H液复灌75 min;PTSL组、PTSM组、PTSH组穿线并结扎冠状动脉左前降支近分支处30 min后,分别给予含5、10、20 mg/L三七三醇皂苷的K-H液复灌75 min。收集5组大鼠平衡灌注20 min、心肌缺血30 min和再灌注15min、再灌注75 min的灌流液,检测大鼠灌流液中肌酸激酶同工酶（CK-MB）和乳酸脱氢酶（LDH）水平。比较5组平衡灌注20 min、局部缺血30 min、再灌注15min和再灌注75 min通过多导生理仪记录的心脏血流动力学参数水平,包括心率（HR）、左心室收缩末压（LVESP）、左心室舒张末压（LVEDP）、左心室发展压（LVDP）、左心室内压上升/下降最大速率（±dp/dtmax）,以及LVESP、LVDP、+dp/dtmax与平衡末差值占比。实验二:将40只健康雄性Wistar大鼠采用随机数字表法,分为对照组、I/R组、PTS组、LY294002组、LY294002+PTS组,各8只。通过Langendorff离体心脏灌流装置建立心脏缺血/再灌注模型,对照组只穿线不结扎,平衡20min后以K-H液持续灌流105 min;I/R模型组平衡20min后穿线结扎冠状动脉左前降支近分支处,令左前降支局部停灌30 min,开放结扎线,K-H液复灌75 min。LY294002组平衡20min后,穿线结扎冠状动脉左前降支近分支处30min,后开放结扎线,以含15 μmol/L LY294002的K-H液复灌75min。PTS组平衡20min后,穿线结扎冠状动脉左前降支近分支处30min,后开放结扎线,以含10mg/L三七三醇皂苷的K-H液复灌75min。LY+PTS组平衡20min后,穿线结扎冠状动脉左前降支近分支处30min,后开放结扎线,先以含15 μmol/LLY294002的K-H液复灌15min,再以含10mg/L PTS的K-H液复灌60min。收集不同时刻的灌流液测量心肌酶学指标（CK-MB、LDH）,并记录不同时刻左心室血流动力学参数（HR、LVESP、LVEDP、LVDP、±dp/dtmax）;Western-blot 检测心肌组织中 Akt、p-Akt、GSK-3β、p-GSK-3β的表达,免疫组化检测Bax、Bcl-2、Caspase-3的表达。2.临床部分评价三七总皂苷治疗冠心病急性冠脉综合征PCI患者的有效性和安全性。通过全面搜索 CNKI、WanFang Date、Sinomed、VIP、PubMed、Embase 数据库。筛选并纳入自建库到2021年1月1日以来三七总皂苷联合西医常规治疗冠心病急性冠脉综合征PCI患者的随机对照试验,后根据Cochrane协作网系统评价员5.1.0版进行评估,并对相关结局指标利用RevMan5.3软件进行Meta分析。研究结果1.实验部分实验一:I/R模型组再灌注15、75 min灌流液中CK-MB和LDH水平均高于对照组[CK-MB:（234±51）U/L 比（12±6）U/L,（203±63）U/L 比（14±3）U/L;LDH:（63.9±9.4）U/L 比（6.2±4.6）U/L,（52.1±9.5）U/L比（6.3±4.8）U/L];PTSL、PTSM、PTSH组再灌注75 min灌流液CK-MB水平和再灌注15 min LDH水平均低于IR模型组,PTSL、PTSH组再灌注75 min LDH水平均低于I/R模型组（均P<0.05）。对照组不同时刻灌流液心肌酶指标水平比较差异均无统计学意义（均P>0.05）。与对照组比较,I/R模型组再灌注15、75 min LVDP、+dp/dtmax 均降低,LVEDP、-dp/dtmax 以及 LVESP、LVDP、+dp/dtmax 与平衡末差值占比均升高（均P<0.05）。与I/R模型组比较,PTSL组、PTSM组、PTSH组再灌注15 min LVEDP,PTSL 组再灌注 75 min LVEDP 均降低,PTSM 组再灌注 75 min LVDP、+dp/dtmax均升高,局部缺血30 min,再灌注75 min-dp/dtmax均降低,PTSL组、PISM组、PTSH组LVESP,LVDP、+dp/dtmax与平衡末差值占比均显着降低（均P<0.05）。PTSL组、PTSH组心率在平衡灌注20 min,PTSM组在平衡灌注20 min,局部缺血30 min和再灌注15、75 min均高于IR模型组（均P<0.05）。实验二:（1）血流动力学参数:对照组HR不同时点无明显变化（P>0.05）,其余各组均不同程度上升,且I/R模型组、LY组、PTS组、LY+PTS组在再灌注75min时均无明显差异（P>0.05）。对照组不同时点LVESP、LVEDP、LVDP、±dp/dtmax无明显变化,其余各组随时间延长出现不同程度下降。再灌注75min时,PTS组明显低于模型组（P<0.05）,而LY294002+PTS组与模型组无明显差异,与PTS组差异显着（P<0.05）。（2）CK-MB、LDH:对照组不同时点无显着变化,其余各组再灌注后心肌酶水平均较缺血30min有显着提升（P<0.05）。各组平衡20min时无明显差异（P>0.05）;局部缺血30min时,各组CK-MB无统计学差异（P>0.05）,而各组LDH较对照组有所升高（P<0.05）;再灌注15min、75min时,各组均较对照组明显升高,PTS组明显低于模型组,LY294002+PTS组高于PTS组（P均<0.05）。（3）Akt、pAkt、GSK-3β、pGSK-3β的表达:缺血再灌注损伤后,各组心肌组织Akt、GSK-3β表达无统计学差异（P>0.05）,pAkt、pGSK在PTS组中表达较模型组有显着提高（P<0.05）,在应用LY294002的2组中表达较模型组显着下降（P<0.05）,且LY294002+PTS 与 PTS 组差异存在统计学意义（P<0.05）。（4）Bax、Bcl-2、Caspase-3 的表达:模型组 Bax、Caspase-3 显着高于对照组（P<0.05）,PTS 与 LY+PTS2 组 Bax、Caspase-3表达低于模型组（P<0.05）。对照组Bcl-2强阳性,模型组显着低于对照组（P<0.05）,PTS组较模型组显着提高（P<0.05）,LY294002+PTS组显着低于PTS组（P<0.05）。2.临床部分最终纳入35篇研究,研究地点均在中国,累计病例共计2963例,其中观察组1488例,对照组1475例,共涉及三七总皂苷制剂4种。统计结局指标:CK-MB、cTnT、LVEF、LVEDD、BNP、hs-CRP、IL-6、TNF-α、TC、TG、LDL-C、HDL-C、冠脉灌注 TIMI血流分级进行连续性变量的Meta分析,结果分别为:CK-MB（SMD=-2.09,95%CI:[-3.04,-1.13],I2=97%,P<0.0001）、cTnT（SMD=-2.37,95%CI:[-3.31,-1.43],I2=97%,P<0.00001）、LVEF（WMD=3.97,95%CI:[2.58,5.36],I2=83%,P<0.00001）、LVEDD（WMD=-3.18,95%CI:[-4.33,-2.04],I2=85%,P<0.00001）、BNP（SMD=-1.89,96%CI:[-2.68,-1.11],I2=96%,P<0.00001）、hs-CRP（SMD=-1.46,95%CI:[-2.02,-0.90],I2=96%,P<0.00001）、IL-6（SMD=-1.87,95%CI:[-2.33,-1.41],I2=91%,P<0.00001）、TNF-α（SMD=-1.22,95%CI:[-1.85,-0.59],I2=94%,P<0.0001）、TC（WMD=-0.57,95%CI:[-0.87,-0.27],I2=84%,P=0.0002）、TG（WMD=-0.27,95%CI:[-0.46,-0.08],I2=84%,P=0.005）、LDL-C（WMD=-0.32,95%CI:[-0.61,-0.03],12=85%,P=0.03）、HDL-C（WMD=0.02,95%CI:[-0.13,0.17],I2=84%,P=0.75）、冠脉灌注 TIMI 血流分级（WMD=0.34,95%CI:[0.26,0.42],I2=30%,P<0.00001）。MACEs 发生率、不良反应发生率进行二分类变量的Meta分析,结果分别为:MACEs发生率（RR=0.48,95%CI:[0.33,0.70],I2=4%,P=0.0002）、不良反应发生率（RR=0.73,95%CI:[0.51,1.04],I2=0%,P<0.08）。提示PNS制剂联合西医常规治疗对PCI患者心肌存在一定的保护作用,尤其是在改善冠脉再灌注情况、降低心血管不良事件发生率方面作用显着。但是纳入研究数量偏少、样本量较小、方法学质量偏低,为进一步评价PNS制剂治疗MIRI的有效性,仍需要未来有更多大样本、高质量的随机对照研究提供更可靠的循证医学证据。研究结论1.在大鼠离体心脏局部I/R损伤模型中,三七三醇皂苷具有减少心肌酶的释放、减轻左心室收缩和舒张功能障碍的作用,可能与其调节PI3K/Akt信号通路有关。2.三七总皂苷制剂对PCI患者心肌保护作用疗效肯定,尤其是在改善冠脉灌流、心血管不良事件方面作用显着。
刘志沛[5]（2020）在《异莲心碱和人参皂苷Rb1的抗心律失常机制》文中研究说明心律失常是心脏疾病的主要并发症,严重的心律失常如室速、室颤会导致心源性猝死,因此心律失常是危害人类生命健康的一个公共卫生问题。心律失常的治疗主要有两类方式,一种是器械和手术治疗,比如植入起搏器、植入式心律转复除颤器,心脏射频消融术;另一种是抗心律失常药物治疗,比如胺碘酮、维拉帕米。虽然器械和手术治疗效果比较好,但也存在各种问题,因此抗心律失常药物治疗仍然是治疗心律失常最常见的策略。目前常用的抗心律失常药物大多数是西药,但是西药有一个棘手的问题,就是副作用较大,因此很多人尝试从传统中草药中开发抗心律失常药物。相较于西药,直接开发中草药及其活性单体优势很多,如中草药在中国乃至亚洲地区已应用数千年,其临床使用、毒性和副作用等方面都比较清楚,因此其开发成本低且安全性较高。炙甘草汤是抗心律失常的名方,在它的基础上研发了许多抗心律失常中成药,例如心速宁等。中成药心速宁由甘草、黄连、莲子心、人参、半夏、茯苓、枳实、常山、苦参、青蒿和麦冬等十一味中草药组成。这些药材的大多数活性成分都做过抗心律失常方面的研究,但有些活性成分在抗心律失常方面的研究不够完整。异莲心碱和人参皂苷Rb1分别提取自莲子心和人参,据报道它们具有多种药理活性,尤其是对心血管具有保护作用。根据上述资料,我们推测异莲心碱和人参皂苷Rb1可能具有抗心律失常的潜质,但其抗心律失常的机制需要深入研究。我们运用全细胞膜片钳技术,记录家兔左心室肌细胞的锋钠电流、晚钠电流、L型钙电流、多种钾电流和动作电位,观察异莲心碱和人参皂苷Rb1对这些电流和动作电位的作用。我们还记录了心室肌细胞的钙瞬变,观察人参皂苷Rb1对心室肌细胞内钙的影响。在细胞层面,也建立了多种病理模型,从缺氧-复氧模型中观察人参皂苷Rb1在缺氧后再复氧的条件下如何影响细胞内钙离子;从海葵毒素Ⅱ（ATX-II）诱导的早期后除极和细胞外高钙诱导的晚期后除极模型中观察异莲心碱和人参皂苷Rb1对后除极这种与心律失常密切相关的病理活动的影响。最后,还观察了人参皂苷Rb1对缺血再灌注损伤引起的心律失常的作用。实验结果显示,异莲心碱浓度依赖性地抑制锋钠电流,半抑制浓度为5.43μmol/L,8μmol/L的异莲心碱使锋钠电流稳态激活曲线右移,稳态失活曲线左移,同时也使锋钠电流时间依赖性复活曲线右移。异莲心碱也能浓度依赖性地抑制L型钙电流,半抑制浓度为1.18μmol/L,2μmol/L的异莲心碱使L型钙电流稳态失活曲线左移,但不影响稳态激活曲线和时间依赖性复活曲线。异莲心碱（1、5、10μmol/L）还能抑制ATX-II诱导增大的晚钠电流,但20μmol/L的异莲心碱不影响内向整流钾电流和延迟整流钾电流的大小。异莲心碱对动作电位的作用表现为抑制动作电位幅度和最大上升速率,缩短动作电位时程,但不影响静息膜电位水平。异莲心碱可以消除ATX-II诱导的早期后除极和细胞外高钙（3.6 mmol/L）诱导的晚期后除极。人参皂苷Rb1浓度依赖性地抑制锋钠电流,半抑制浓度为13.22μmol/L,20μmol/L的人参皂苷Rb1使锋钠电流稳态失活曲线左移,但不影响稳态激活曲线。人参皂苷Rb1也能浓度依赖性地抑制L型钙电流,半抑制浓度为41.89μmol/L,80μmol/L的人参皂苷Rb1使L型钙电流稳态失活曲线左移,但不影响稳态失活曲线。人参皂苷Rb1（40、80、160μmol/L）对内向整流钾电流和延迟整流钾电流的大小无影响。人参皂苷Rb1对动作电位的作用表现为抑制动作电位幅度和最大上升速率,缩短动作电位时程,但不影响静息膜电位水平。人参皂苷Rb1不仅可以降低细胞内钙浓度,抑制缺氧-复氧引起的钙超载的发生,还能消除细胞外高钙（3.6 mmol/L）诱发的晚期后除极。40μmol/L人参皂苷Rb1降低了缺血再灌注损伤引发的室性早搏的次数,延迟了室性早搏的首发时间,也降低了室性心动过速的发生率。综上所述,异莲心碱通过抑制锋钠电流、L型钙电和晚钠电流,消除早期后除极和晚期后除极的发生来发挥抗心律失常的作用;人参皂苷Rb1通过抑制锋钠电流、L型钙电流,降低细胞内钙水平和抑制钙超载的发生来发挥抗心律失常的作用。
马如风[6]（2020）在《基于ATF3/MAP2K3/p38 MAPK通路探究活血益气组分中药防治心梗后大鼠心室重构作用机制》文中提出研究目的最新流行病学研究表明,中国地区居民急性心肌梗死（Acute myocardial infarction,AMI）的发病率仍保持上升趋势,且渐趋年轻化。急性心肌梗死后心室重构（Ventricular remodeling,VR）是心肌梗死后心脏出现的一种代偿性、继发性的复杂病理生理过程,涉及多种影响因素。长期持续的心室重构导致心脏结构和功能异常,最终诱发心力衰竭或死亡,严重影响患者的生活质量,是影响心血管病患者死亡率的决定因素之一。因此,抑制或逆转心室重构过程已成为预防和治疗心肌梗死后患者心室重构的关键环节。临床研究表明,急性心肌梗死后心室重构患者基本中医证型为气虚血瘀证,或兼挟其他证型。活血益气中药及其有效组分作为基本方在治疗心室重构方面取得了显着的临床疗效,尤其是有效组分中药,其成分相对明确,药理作用较为清晰,且制剂多样、携带方便,具有广阔的应用前景。国内外研究表明,三七总皂苷（Panaxnotoginsengsaponins,PNS）具有扩张血管、改善微循环、减少心肌耗氧量等药理作用;丹参酮IIA（Tanshinone IIA,Tan IIA）能通过抑制心肌纤维化,减少心肌细胞凋亡和炎症反应,改善心脏神经重构和电生理异常等;人参总皂苷（Total ginsenosides,TGS）显着的耐缺氧作用可增强心肌收缩力,加快脂质代谢和能量转化过程,从而改善AMI后的心功能和血流动力学指标,三者是本院院内制剂活血化瘀方主要组成药物的中药有效成分,单独应用可在不同层面上保护心肌梗死后心血管系统重构,而三者联合使用干预急性心肌梗死后心室重构还未有研究。最新文献研究表明,ATF3/MAP2K3/p38 MAPK信号通路可以通过调节NFκB相关因子的表达影响心肌缺血期的炎症浸润,同时抑制TGF-β1和Collagenl.的表达,降低心肌成纤维细胞功能,保护心肌细胞及其细胞外基质的重构;还能通过减少心肌细胞中Runx1、提高PPARα的表达改善心肌细胞的能量代谢从而防治心肌梗死后心室重构。根据导师的多年临床用药经验和本课题组前期的研究基础,结合网络药理学预测药物-疾病靶点,本研究探索活血益气组分配伍中药PNS、TanⅡA、TGS联合用药,以PNS为君,TanⅡ 和 TGS 分别佐使,通过调节 ATF3、MAP2K3、p38MAPK、TGF-β1、Collagen I、NFκB p65、IκB、Runx1、PPARα 等基因和蛋白的表达,从而激活 ATF3/MAP2K3/p38 MAPK信号通路,发挥防治心肌梗死后心室重构的作用,为将活血益气组分中药开发成防治急性心肌梗死后心室重构的临床新药提供扎实有力的实验依据。研究方法结扎健康的SPF级SD（Sprague Dawley）雄性大鼠心脏冠状动脉左前降支血管,构建心肌梗死动物模型。将造模成功的大鼠随机均分为六组:模型组（MI）、福辛普利组（Fosinopril,FIP,1.2mg/kg·d）、三七总皂苷组（PNS,40mg/kg·d）、丹参酮IIA 组（TanⅡA,70mg/kg·d）、人参总皂苷（TGS,30 mg/kg·d）、组分配伍组（Component compatibility,CC,PNS 40mg/kg-d+Tan IIA 70mg/kg.d+TGS 30mg/kg.d）;假手术组（Sham）大鼠在冠状动脉左前降支相同位置只穿线不结扎,作为阳性对照。各给药组以灌胃方式给予相应药物,MI组大鼠和Sham组大鼠给予去离子水,连续给药4周。4周后检测各组大鼠心脏超声后取材,计算各组大鼠心脏质量指数（Heartweight/bodyweight,HW/BW）;用HE和Mansson染色法观察大鼠心脏的病理学改变和心肌纤维化程度;用ELISA法检测大鼠血清中心室重构标志物CRP、TNF-α、GDF-15和MMP9/TIMP1水平以及大鼠心肌组织中游离脂肪酸（Free fatty acid,FFA）含量;用高效液相色谱法检测大鼠心肌组织中ATP、ADP、AMP水平;用化学比色法检测大鼠心肌组织中Na+-K+-ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶含量;用免疫组织化学法、Western blotting法和RT-PCR法检测大鼠心肌组织 ATF3/MAP2K3/p38 MAPK 信号通路中 ATF3、MAP2K3、p38 MAPK、NFκB p65、TGF-β1、Collagen I、Runx1、PPARα等相关蛋白和基因的表达水平。研究结果1活血益气组分配伍中药对心肌梗死大鼠心脏功能和结构的影响1.1超声心动图检测大鼠心脏,结果显示,与假手术组大鼠相比,模型组大鼠心脏左室收缩末期内径（LVIDs）、左室舒张末期内径（LVIDd）明显升高,左室射血分数（LVEF）和左室缩短分数（LVFS）显着降低（P<0.01）;给药4周后,与模型组相比,各给药组大鼠的LVIDs和LVIDd降低,LVEF和LVFS升高（P<0.01或0.05）;其中组分配伍中药组心脏超声各指标的改善程度明显优于单味组分中药组（P<0.05）;1.2光镜下观察HE染色,结果表明,与假手术组大鼠相比,模型组大鼠心肌纤维排列紊乱、间隙增宽,且心肌纤维染色不均;心肌组织较松散,心肌细胞体积增大;有一定程度的炎性细胞浸润和结缔组织增生,伴见心肌纤维的溶解、断裂、坏死等,结合心脏超声结果表明大鼠心肌梗死后心室重构动物模型建立成功;给药4周后,与模型组相比,各给药组大鼠心肌的病理结构都有不同程度的改善,各给药组大鼠心肌组织染色大致均匀,肌纤维较完整,分布较整齐,炎性浸润略减轻,细胞形态和结构得到改善,其中组分配伍中药组改善更明显;1.3光镜下观察Masson染色,结果表明,与假手术组大鼠相比,模型组大鼠心肌组织中出现较明显胶原纤维和结缔组织增生,伴见心肌胶原和纤维瘢痕增多;给药4周后,与模型组相比,各给药组大鼠心肌纤维和细胞外基质重构均有不同程度的改善,伴见少量心肌纤维增生,胶原沉积有不同程度的减少（P<0.01或0.05）,其中组分配伍组较其他单味组分组改善更为显着（P<0.05）;1.4心脏质量指数分析结果显示,与假手术组大鼠相比,模型组大鼠的心脏质量指数明显升高（P<0.01）;给药4周后,与模型组相比,各给药组大鼠的心脏质量指数降低（P<0.01或0.05）;且组分配伍组大鼠心脏质量指数下降更为明显（P<0.05）;1.5 ELISA法检测给药4周后大鼠血清心室重构标志物水平,结果显示,与假手术组大鼠相比,模型组大鼠血清中CRP、TNF-α GDF-15和MMP9/TIMP1水平明显升高（P<0.01）;给药4周后,与模型组相比,各给药组大鼠血清中CRP、TNF-α、GDF-15和MMP9/TIMP1水平降低（P<0.01或0.05）;与各单味组分给药组相比,组分配伍组各血清标志物水平改善较为显着（P<0.05）。2活血益气组分配伍中药对心肌梗死后大鼠心脏ATF3/MAP2K3/p38 MAPK信号通路的影响2.1结扎大鼠心脏冠状动脉左前降支4周后,免疫组织化学、Western blotting和RT-PCR检测结果表明,与假手术组大鼠相比,模型组大鼠心肌组织中Collagen I和TGF-β1的表达水平升高（P<0.05）;给药4周后,与模型组大鼠相比,活血益气组分配伍中药组大鼠心肌组织中Collagen I和TGF-β1的表达下降,一定程度上改善心肌梗死后细胞外基质重构和心肌纤维化程度（P<0.05）;2.2结扎大鼠心脏冠状动脉左前降支4周后,免疫组织化学、Western blotting和RT-PCR检测结果表明,与假手术组大鼠相比,模型组大鼠心肌组织中ATF3的表达水平降低,MAP2K3、p38 MAPK的表达水平升高（P<0.05）;活血益气组分配伍中药给药4周后结果显示,与模型组大鼠相比,心肌梗死大鼠心肌组织中的ATF3蛋白和基因的表达升高、MAP2K3、p38 MAPK的表达水平降低（P<0.05）;2.3结扎大鼠心脏冠状动脉左前降支4周后,免疫组织化学、Western blotting和RT-PCR检测结果表明,与假手术组大鼠相比,模型组大鼠心肌组织中NFκB p65的表达水平升高（P<0.05）;活血益气组分配伍中药给药4周后结果显示,与模型组大鼠相比,心肌梗死后心室重构大鼠心肌组织中的p-NFκB p65/NFκB p65和p-IκBα表达水平降低（P<0.01 或0.05）;3活血益气组分配伍中药对心肌梗死后大鼠心脏能量代谢的影响3.1高效液相色谱法检测给药4周后大鼠心肌组织中ATP、ADP、AMP水平,结果显示,与假手术组大鼠相比,模型组大鼠心肌组织中ATP、ADP水平明显降低,AMP水平明显升高（P<0.01或0.05）;活血益气组分配伍中药给药4周后,与模型组大鼠相比,心肌梗死后心室重构大鼠心肌组织中ATP、ADP水平升高,AMP水平降低（P<0.01或0.05）,改善了心肌梗死后大鼠心肌组织的能量生成;3.2化学比色法检测给药4周后大鼠心肌组织中Na+-K+-ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶含量,结果显示,与假手术组大鼠相比,模型组大鼠心肌组织中Na+-K+-ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶含量明显降低（P<0.01）;活血益气组分配伍中药治疗4周后,与模型组大鼠相比,心肌梗死后心室重构大鼠心肌组织中Na+-K+-ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶水平明显升高（P<0.01）,提高了心肌梗死后大鼠心肌组织中能量代谢酶水平;3.3 ELISA法检测给药4周后大鼠心肌组织中游离脂肪酸水平,结果显示,与假手术组大鼠相比,模型组大鼠心肌组织中游离脂肪酸水平明显升高（P<0.05）;活血益气组分配伍中药治疗4周后,与模型组相比,心肌梗死后心室重构大鼠心肌组织中游离脂肪酸水平出现降低（P<0.05）,促进了心肌梗死后大鼠心肌组织的能量应用;3.4结扎大鼠心脏冠状动脉左前降支4周后,免疫组织化学、Western blotting和RT-PCR检测结果表明,与假手术组大鼠相比,模型组大鼠心肌组织中Runx1的表达水平明显升高,PPARα的表达水平明显降低（P<0.01）;活血益气组分配伍中药治疗4周后,与模型组大鼠相比,心肌梗死后心室重构大鼠心肌组织中Runx1的表达水平降低、PPARα的表达水平升高（P<0.01或0.05）。结论1活血益气组分配伍中药能改善心肌梗死后大鼠的心脏结构和功能,降低心肌梗死大鼠血清炎症水平,且活血益气组分配伍中药较单味组分中药呈现明显的协同增效作用;2活血益气组分配伍中药通过抑制心肌梗死大鼠心肌组织中Collagen I和TGF-β1基因和蛋白的表达水平,抑制了成纤维细胞的功能,改善心肌梗死后心肌组织纤维化和心肌细胞外基质重构程度;3活血益气组分配伍中药通过激活心肌梗死大鼠心肌组织中ATF3/MAP2K3/p38 MAPK炎症信号通路,进而降低了 NFκB/IκB炎症信号的过度激活,同时通过调节心肌组织中ATF3/MAP2K3/p38 MAPK信号通路下游能量代谢效应因子Runx1和PPARα的表达,改善了心肌组织中能量代谢紊乱,可能是预防和治疗心肌梗死后心室重构的重要分子机制之一。
秦梦[7]（2020）在《基于miR-22-5p/RAP1/ERK信号通路探讨芦丁对吡柔比星所致心肌损伤的保护作用》文中研究表明蒽环类药物,包括多柔比星（Doxorubicin,DOX）、表柔比星（Epirubicin,EPI）、吡柔比星（Pirarubicin,THP）等,广泛用于实体恶性肿瘤和血液系统肿瘤的治疗,但是蒽环类药物具有诸多不良反应,心脏毒性是其最为严重的不良反应,在一定程度上限制了它的应用。右雷佐生（Dexrazoxane,DZR）是目前FDA唯一批准使用的心脏保护药,但有报道提出DZR可能会加重化疗药物引起的骨髓抑制,因此,临床上亟需寻找一种更加安全有效的心脏保护药。芦丁,又称芸香苷、维生素P、路丁、紫斛皮苷等,是一种来源广泛的黄酮类化合物,主要存在于芸香叶、烟叶等多种植物中,具有抗炎、抗氧化、抗肿瘤等多种重要的生物活性。本课题组前期研究已证实RUT可以改善THP所致的心肌损伤,并制作了RUT干预THP诱导大鼠心肌损伤的miRNA芯片。本研究从miRNA芯片入手,通过生物信息学分析构建了miR-22-5p/RAP1/ERK信号通路,并以该信号通路为切入点研究其在RUT对THP所致大鼠心肌损伤中的作用及机制。以期阐明THP引起心肌损伤的分子机制,为RUT改善THP所致心肌损伤提供新靶点。本研究分为3部分:（1）芦丁保护吡柔比星所致大鼠心肌损伤的miRNA芯片生物信息学分析及miR-22-5p/RAP1/ERK信号通路构建首先对芯片结果进行分析。将差异基因的条件设定为p<0.05且|log2 fold change|>0.7,再对比RUT+THP组/THP组及THP组/CON组,选出RUT能回调THP异常变化且在大鼠和人中同源性较好的miRNAs。查阅相关文献确定研究对象miRNA。再通过Target Scan和miRDB数据库对其靶基因预测,采用omicshare和DAVID数据库对预测到的靶基因进行GO分析和KEGG分析,并构建信号通路。结果显示:（1）符合上述条件的miRNAs共18个,其中上调8个,下调10个（RUT+THP组/THP组）;（2）查阅文献选择与心脏保护研究相关,且未见有蒽环类药物引起心肌损伤相关报道的miR-22-5p作为研究对象;（3）通过靶基因预测和KEGG富集分析,发现在RAP1A m RNA的3’UTR处有miR-22-5p的潜在结合位点,靶向性较好,且RAP1A位于MAPK信号通路中,由此构建miR-22-5p/RAP1/ERK信号通路,并基于此通路进行RUT对THP所致心肌损伤保护作用的探讨。（2）miR-22-5p/RAP1/ERK信号通路在芦丁改善吡柔比星所致大鼠心肌损伤中的介导作用通过尾静脉注射THP（18mg/kg,分6次）的方法复制大鼠心肌损伤模型,以RUT（50mg/kg）进行预保护。观察大鼠心电图、心功能参数及心肌病理学改变,并以qPCR方法检测大鼠心肌组织中miR-22-5p和RAP1A m RNA的表达,Western blot方法检测大鼠心肌组织中RAP1/ERK通路相关蛋白表达。结果显示:（1）RUT可减轻THP所致的心电图、心功能及心肌病理学改变;（2）RUT可逆转THP导致的miR-22-5p表达下降,与芯片结果一致;（3）RUT可逆转THP所致的RAP1A基因表达、RAP1A蛋白表达和BRAF、MEK1/2、ERK1/2蛋白磷酸化水平增加,提示RUT可能通过miR-22-5p调控RAP1A及下游ERK信号通路介导其对THP所致心肌损伤的保护作用。（3）miR-22-5p在吡柔比星处理大鼠H9c2心肌细胞损伤中的作用及机制研究建立THP诱导H9c2细胞损伤模型,以RUT进行预保护,通过qPCR方法检测RUT对miR-22-5p和RAP1A m RNA表达的影响。构建miR-22-5p过表达/沉默瞬转H9c2细胞株,应用qPCR方法检测miR-22-5p和RAP1A m RNA的表达,并利用ROS、TUNEL、Western blot实验检测细胞内ROS水平、凋亡状况及RAP1/ERK通路上相关蛋白的变化。结果显示:（1）RUT能逆转THP所致的miR-22-5p下调,与芯片结果一致;（2）miR-22-5p过表达时,RAP1A m RNA表达下调,miR-22-5p沉默时,RAP1A m RNA表达上调,miR-22-5p能够靶向调节RAP1A;（3）miR-22-5p能够减少THP所致的H9c2细胞内ROS产生,减少细胞凋亡,使THP所致的RAP1A蛋白表达水平,BRAF、MEK1/2、ERK1/2蛋白磷酸化水平上调作用受到抑制,发挥与RUT同样的作用。上述结果表明RUT可能是通过上调miR-22-5p,抑制RAP1/ERK信号通路的激活发挥心脏保护作用的。综上所述,本研究通过THP复制大鼠心肌/H9c2细胞损伤模型,应用RUT进行预保护,并通过转染技术构建miR-22-5p过表达/沉默瞬转H9c2细胞株,采用ROS、TUNEL、qPCR、Western blot及形态学观察等方法,应用体内和体外实验,从miR-22-5p/RAP1/ERK通路角度系统的探讨RUT保护THP所致心肌损伤的作用及机制,得出如下结论:（1）RUT可改善THP所致的大鼠心电图、心功能及心肌形态学变化,说明RUT对THP所致大鼠心脏毒性具有保护作用。（2）RUT可以逆转THP所致的大鼠心肌组织/H9c2细胞中miR-22-5p表达下调,RAP1A基因及蛋白表达增加,BRAF、MEK1/2、ERK1/2蛋白磷酸化水平增加,减少THP所致的H9c2细胞内ROS产生和细胞凋亡。在H9c2细胞中过表达miR-22-5p与RUT作用相同。提示RUT对THP所致心肌/H9c2细胞损伤的保护作用可能是通过上调miR-22-5p,进而抑制RAP1/ERK信号通路实现的。（3）在H9c2细胞中转染miR-22-5p后,miR-22-5p过表达可下调RAP1A m RNA表达,miR-22-5p沉默可上调RAP1A m RNA表达,证明miR-22-5p可靶向调控RAP1A。
魏惠平[8]（2020）在《当归醇提物对SHR血压及靶器官的影响及分子机制探讨》文中研究表明目的1.明确当归醇提物对SHR血压和靶器官的作用。2.基于Th17/Treg细胞平衡探讨当归醇提物干预SHR血压和靶器官损伤的分子机制。方法1.系统检索Cochrane、Web of science、PubMed、Embase、中国知网、万方、CBM七个数据库,纳入当归和含有当归的复方制剂治疗高血压及其并发症的相关研究。使用EXCEL 2013和SPSS 21对数据进行整合与处理,并通过气泡图来呈现结果。2.结合70%乙醇热回流法和喷雾干燥法制备当归有机酸;建立高效液相色谱法测定当归醇提物中阿魏酸含量的方法,通过阿魏酸含量控制当归醇提物的质量。3.动物分组:空白组9只WKY大鼠,模型组、阳性对照组（贝那普利）、当归醇提物低、中、高剂量组各9只SHR大鼠。空白组和模型组用等体积生理盐水,阳性对照组用贝那普利片10mg/d,当归醇提物低、中、高剂量组分别用对应剂量,进行灌胃,每日1次,连续8周。监测各组大鼠血压及其他生理参数;通过大鼠心脏彩超、HE染色、Masson染色评估心脏形态结构和功能;采用ELISA、Western Blot、RT-PCR实验方法检测血清中NF-κβ、VCAM-1、ET-1、ICAM-1、eNOS含量,并基于蛋白-基因层面监测RAAS系统和氧化应激成分的表达;评价当归醇取物对SHR肝肾功能的影响。4.基于网络药理学筛选当归治疗高血压及靶器官保护的信号通路。5.建立SHR模型,随机分为模型组、贝那普利组、当归醇提物高剂量组,并设空白组（WKY）。ELISA法检测血清炎症指标IL-6、CRP以及Th17、Treg表达因子IL-17、IL-23、IL-10、TGFβ1含量;流式细胞技术检测外周血中Th17、Treg细胞,并计算Th17/Treg比率;qPCR检测大鼠肾组织转录因子FoxP3和RORγt的表达;Western Blot检测大鼠肾组织p38、p-p38、FoxO1、p-FoxO1、SGK1和IL-23R表达。结果1.Evidence Mapping分析纳入的RCT研究,总有效性结局指标占69.4%,有效率与对照组相比具有统计学差异;纳入研究干预措施中所用的中药药性将其分为补气活血法、补气养血法、补气养阴活血法等八大类,大部分药性类型为活血化瘀方;纳入文献中治疗组与对照组在降压、靶器官保护,不良反应等方面具有统计学差异。2.当归醇提物的制备及质量控制当归醇提物呈棕褐色细粉。高效液相色谱条件为C18色谱柱,流动相由乙腈-0.1%磷酸溶液组成,梯度洗脱,洗脱时间为:0-30 min,A:95%-5%（v/v）,B:5%-95%（v/v）;检测波长为316 nm;该方法专属性强,精密度,回收率能满足体外分析要求;当归醇提物中阿魏酸平均含量为（151.525±0.002）%（μg/g）。3.当归醇提物对SHR的降压效果评价指标及肝肾功能影响血压及一般状况:给药2、4、6、8周后,贝那普利组、当归醇提物高剂量组收缩压和舒张压均低于模型组（P<0.01）。与模型组相比,贝那普利组与当归醇提物中、高剂量组大鼠活动积极,反应灵敏,睡眠少、体毛光泽,弓背表现少,体重升高。心脏形态结构和功能:（1）彩超:与空白组相比,模型组大鼠心脏LVEDD、LVESD减小,IVSTD及LVPWTD均明显增厚,EF、FS、E/A降低（P<0.05）。与模型组相比,贝那普利组LVEDD、LVESD增加,EF、FS、E/A提高,IVSTD、LVPWTD降低,高剂量当归醇提物明显增了LVEDD、LVESD、EF、FS、E/A,差异具有统计学意义（P<0.05）。（2）HE染色:与空白组比较,模型组SHR心肌细胞体积增大、心肌纤维走形紊乱、细胞核染色加深、细胞间隙增大伴明显的组织胶原沉积及炎症细胞浸润;与模型组相比,贝那普利组及当归醇提物高剂量组SHR心肌纤维走形整齐、细胞核染色正常,未见明显的炎症细胞浸润及细胞间质胶原沉积。（3）Masson染色显示:与空白组比较,模型组心肌组织间隙可见大量胶原纤维沉积、细胞间隙增宽、心肌细胞形态受压失去原有的梭形结构、血管周围大量的胶原沉积;与模型组比较,贝那普利及当归醇提物高剂量组心肌纤维间隙、血管周围胶原沉积明显减少、心肌细胞梭形结构清晰可见。血管内皮功能及RAAS系统指标:（1）与空白组比较,模型组大鼠VCAM-1、ET-1、ICAM-1蛋SHR白表达上升,基因表达明显上调,氧化应激因子eNOS蛋白表达下降,基因表达明显下调（P<0.01）;与模型组比较,贝那普利组及当归醇提物高剂量组VCAM-1、ET-1、ICAM-1蛋白表达下降,基因表达下调,而eNOS蛋白表达升高,基因表达上调（P<0.01）。（2）与空白组比较,模型组大鼠AT1-R蛋白表达升高,基因表达上调,AT2-R蛋白表达下降,基因表达下调（P<0.05）;与模型组比较,贝那普利组及当归醇提物组AT1-R蛋白表达下降,基因的表达下调,AT2-R蛋白表达升高,基因表达上调（P<0.05）。肝肾功能影响的初步评价:与空白组比较,实验各组大鼠血清生化指标ALT、AST、BUN、CREA均在同一水平,无统计学差异（P>0.05）。4.网络药理学探讨当归防治高血压的机制研究当归治疗高血压时主要涉及生物膜合成、脑肠轴发育、细胞内钙信号转导、平滑肌收缩、刺激cAMP合成、脂多糖反应、G蛋白耦连的信号转导等生物过程;MAPK/SGK1/FoxO1/RORγt/IL-23R信号通路可能通过调节Th17/Treg细胞的平衡发挥降低SHR模型血压及靶器官保护的作用。5.当归醇提物干预SHR血压和靶器官损伤的作用机制肾脏组织病理:与空白组比较,SHR模型组大鼠肾小球纤维化明显,肾小管上皮细胞肿胀,管腔变窄,肾小管周围的毛细血管受压,形态欠规则,间质肿胀,炎性细胞浸润;与模型组比较,贝那普利组、当归醇提物高剂量组大鼠肾小球纤维化减轻,肾小管形态规则,炎性浸润减少。血清炎症指标:（1）与模型组比较,贝那普利组、当归醇提物高剂量组IL-6、CRP的表达降低（P<0.05）。（2）与空白组比较,模型组大鼠Th17细胞百分比上升,Treg细胞百分比明显下降,Th17/Treg细胞比值上升;与模型组大鼠比较,贝那普利组、当归醇提物高剂量组Th17细胞百分比下降,Treg细胞百分比上升,Th17/Treg细胞比值明显下降（P<0.05）。（3）与模型组比较,贝那普利组、当归醇提物高剂量组IL-17、IL-23均降低,差异具有统计学意义（P<0.05）。（4）与模型组比较,贝那普利组、当归醇提物高剂量组IL-10、TGFβ1均降低,差异具有统计学意义（P<0.05）。RORγt、FoxP3的表达:（1）与空白组相比,模型组RORγt表达降低（P<0.05）;贝那普利组、当归醇提物高剂量组RORγt表达均低于模型组（P<0.05）。（2）与空白组相比,模型组Fox P3表达升高（P<0.05）;贝那普利组、当归醇提物高剂量组Fox P3表达均升高于模型组（P<0.05）。p38/MAPK通路相关因子的表达:与空白组比较,模型组SHR肾脏组织中p-p38、SGK1、p-FoxO1和IL-23R的表达水平升高（P<0.05）;与模型组相比,贝那普利组、当归醇提物高剂量组大鼠肾脏组织中p-p38、SGK1、p-FoxO1和IL-23R的表达水平降低（P<0.05）。结论1.目前的研究现状提示当归对高血压治疗的降压及靶器官保护有效且不良反应较低,但其疗效有待更多的研究进一步证明。2.当归醇提物可以改善SHR一般情况,一定程度上降低SHR血压,能够逆转SHR心肌重塑、改善内皮功能,且无明显肝、肾功能影响。3.Th17/Treg平衡失调是SHR模型高血压发病的关键因素,当归醇提物高剂量组通过调节p38MAPK/SGK1/FoxO1/RORγt/IL-23R介导的Th17/Treg平衡,降低SHR血压,防治其靶器官损伤。
李敏[9]（2020）在《亚砷酸钠保护心肌缺血再灌注损伤的机制研究》文中研究指明背景急性心肌梗死是世界范围内常见的急危重症,临床常见的治疗方法为通过药物或手术实现血管再通,然而心肌缺血后恢复血流可引起再灌注损伤,是影响治疗效果及预后的重要因素。缺血再灌注损伤的发生机制还不十分明确,现有理论包括再灌注导致细胞内氧自由基（ROS）的大量产生、局部炎症作用造成的细胞损伤。在动物实验中降低ROS产生、减轻局部炎症反应、增加血红色加氧酶-1（HO-1）表达或者通过缺血预处理使细胞产生应激反应可以降低再灌注损伤。但是目前临床上还没有可以使用的降低缺血再灌注损伤的特效药物,因此研究缺血再灌注损伤的发生机理,开发新的治疗策略具有重要的理论意义和临床价值。文献报道亚砷酸钠可以诱导HO-1的表达和细胞应激反应,于是我们猜想亚砷酸钠可能对心肌缺血再灌注损伤有保护作用。本课题拟通过实验探讨亚砷酸钠对心肌缺血再灌注损伤的作用和机制。目的通过大鼠体内缺血再灌注损伤模型研究亚砷酸钠预处理对心肌的保护作用及对心肌缺血再灌注损伤保护作用的机制。通过体外实验探讨亚砷酸钠对心肌细胞氧自由基产生的影响和对心肌细胞抗氧化损伤的作用;探究亚砷酸钠诱导的细胞应激反应及对血红素加氧酶-1（HO-1）表达的影响;进一步研究亚砷酸钠对NLRP3炎症小体的作用特点。以此探讨亚砷酸钠对心肌缺血再灌注损伤的保护及其作用机制,为缺血再灌注损伤的发生寻找新的防治方法和策略。方法1.建立大鼠在体心肌缺血再灌注模型,24h后心脏冷冻切片,TTC染色检测心肌梗死面积（Infarctsize）和心肌缺血区（Areaatrisk,AAR）,计算心肌梗死面积与心肌缺血区的比值（Infarctsize/AAR）,评价亚砷酸钠对大鼠心肌缺血再灌注损伤的作用。2.大鼠心脏功能评估。大鼠心肌缺血再灌注恢复24h后,VEVO 2100高分辨率体内超声心动图成像系统在M模式下进行大鼠心脏超声采集,在胸骨旁左心室长轴或短轴视图上测量左心室舒张末期内径和收缩末期内径。计算左心室射血分数（EF%）和左心室短轴缩短率（FS%）,所有测量结果为五个连续心动周期的平均值。3.体外缺氧复氧模型评估亚砷酸钠对心肌细胞活性氧（超氧阴离子和过氧化氢）产生的影响。将H9c2细胞在饱和氮气中培养不同时间后恢复正常通气,用细胞色素C和肾上腺素的颜色变化检测超氧阴离子,用二甲基酚橙法检测过氧化氢的含量。4.体外细胞代谢抑制模型评估亚砷酸钠对心肌细胞的存活率的作用。将H9c2细胞进行饥饿及呼吸抑制处理不同时间,恢复正常培养条件,用MTT法检测细胞存活率。5.亚砷酸钠对心肌细胞抗氧化损伤的作用。在不同时间用亚砷酸钠预处理或后处理心肌细胞1h,换液后用过氧化氢处理心肌细胞8h,MTT检测细胞存活率。6.用纯化的线粒体进行体外呼吸实验。分离并纯化大鼠肝脏线粒体,用反应缓冲液重悬并调整线粒体浓度,加入呼吸链复合体Ⅰ或Ⅱ偶联的代谢底物,以及ADP和抑制剂,用极谱法溶氧仪实时测量并记录反应体系的氧浓度。亚砷酸钠在反应前或反应过程中加入,观察其对线粒体呼吸的作用。7.Western Blot检测eIF2α的磷酸化和HO-1的表达,反转录PCR检测胞质应激下游基因GADD34和CHOP的表达变化。8.NLRP3炎症小体活化实验。THP-1细胞先用佛波酯（PMA）诱导分化过夜;分化后的THP-1细胞或原代培养骨髓来源的巨噬细胞（BMDM）用LPS预处理3h,再用NLRP3炎症小体的不同激活剂如尼日利亚菌素（Nigericin）、ATP等处理30min到1h,收集上清ELISA检测IL-1beta的含量。结果1.大鼠体内心肌缺血再灌注模型实验结果显示,亚砷酸钠预处理可显着降低心肌梗死区与心肌缺血区的比值（P<0.0001）,心脏超声结果显示亚砷酸钠增加左心室射血分数和左室短轴缩短率（P<0.01）。股动脉插管测量结果显示实验组和对照组的心率、收缩压和舒张压没有显着改变。2.在体外缺氧复氧模型中亚砷酸钠对心肌细胞活性氧自由基的产生没有显着影响（P>0.05）。3.在体外细胞代谢抑制模型中,亚砷酸钠对H9c2细胞的存活率没有显着影响（P>0.05）。4.亚砷酸钠预处理显着降低了过氧化氢造成的H9c2细胞损伤。5.在体外线粒体呼吸实验中,亚砷酸钠可抑制复合物Ⅰ-底物偶联的线粒体呼吸,对复合物Ⅱ-底物偶联的线粒体呼吸无显着作用。6.亚砷酸钠的短暂处理可诱导eIF-2α的磷酸化及其下游基因GADD34和CHOP的表达;亚砷酸钠可诱导具心血管保护作用的HO-1的表达。7.细胞实验发现,亚砷酸钠可显着抑制NLRP3炎症小体的活化,并且主要抑制炎症小体活化的准备阶段。提示亚砷酸钠对心肌缺血再灌注损伤有保护作用。结论1.亚砷酸钠可显着降低心肌梗死区与心肌缺血区的比值,增加左心室射血分数和左室短轴缩短率,对心肌缺血再灌注损伤起到保护作用。2.亚砷酸钠预处理对心肌缺血再灌注损伤的保护作用机制包括:降低过氧化氢对细胞的氧化损伤;诱导eIF-2α的磷酸化和血红素加氧酶-1的表达;抑制NLRP3炎症小体的活化。
张晓锋[10]（2020）在《KP-4对缺血再灌注损伤的心肌保护作用及其机制研究》文中研究表明研究背景缺血性心脏病（Ischemic heart disease,IHD）是全球最常见的死亡原因之一,其目前最有效的治疗策略是迅速恢复心脏中缺血部位的血液供应（也称为再灌注治疗）。然而,再灌注本身也可引起进一步的心肌损伤,即心肌缺血再灌注损伤（Ischemia-reperfusion injury,IRI）。IRI的病理过程复杂,其病理机制尚未彻底阐明。研究认为氧化应激、钙离子超载、生理p H值的快速恢复、线粒体通透性转换孔（Mitochondrial permeability transition pore,m PTP）的开放、代谢紊乱和炎症反应为其主要病理介导因素。其中,再灌注期产生大量的活性氧（Reactive oxygen species,ROS）导致前氧化系统和抗氧化系统平衡紊乱,大量的ROS引起细胞损伤,导致心肌细胞坏死和凋亡的现象称为氧化应激。氧化应激被认为是心肌缺血再灌注损伤的主要原因。抑制心肌细胞氧化应激及氧化应激导致的心肌细胞凋亡和坏死是临床干预缺血再灌注损伤的重要策略,对缺血类心脏疾病病人的预后具有重要意义。心肌缺血再灌注损伤严重降低了再灌注治疗的益处,影响患者的治疗。目前基础研究和临床研究中用于缓解心肌缺血再灌注损伤的干预措施主要包括:缺血预适应、缺血后适应、远程缺血调节和药物干预。以上措施虽然能够一定程度上缓解心肌缺血再灌注损伤,然而,大部分研究还局限在基础实验阶段,而且在临床应用过程中都存在一定的局限性,其临床效果还有待进一步验证。大量研究表明,缺血预适应和后适应等治疗手段对心肌的保护作用与激活再灌注损伤补救激酶（Reperfusion injury salvage kinase,RISK）信号通路相关。RISK信号通路主要包括ERK1/2途径和PI3K/Akt途径。PI3K/Akt和ERK1/2两条信号通路的激活可以调控其下游靶标糖原合成酶激酶-3β（Glycogen synthase kinase-3β,GSK-3β）的活性,同时促进己糖激酶-II（Hexokinase-II,HK-II）与线粒体的结合,并调控Bcl-2家族等线粒体相关的蛋白,最终抑制线粒体的结构和功能的损坏,对缺血再灌注损伤的心肌有保护作用。RISK信号通路是抑制缺血再灌注损伤最重要的靶标之一。异甜菊醇是甜菊醇的对映体,是由贝壳杉烷类化合物甜菊醇苷中化学提取的一种单体。异甜菊醇钠（Isosteviol sodium,STVNa or KP-4）是异甜菊醇的钠盐形式。研究表明,异甜菊醇具有抑制豚鼠和大鼠心肌缺血再灌注损伤的作用。然而,KP-4在缺血再灌注中的心肌保护作用及其潜在作用机制尚不完全清楚,需要进一步研究。目的探究KP-4抑制心肌缺血再灌注损伤的作用及其机制。本课题组前期研究表明,KP-4能够抑制心肌细胞的线粒体损伤。因此,本研究试图探索其是否通过Akt/GSK-3β信号通路和HK-II途径来抑制线粒体损伤,从而缓解心肌细胞氧化应激损伤,起到对心肌的保护作用的。方法（1）采用Langendorff离体心脏灌流系统,通过结扎左前降支冠状动脉的方法构建大鼠急性心肌缺血再灌注模型,停灌-复灌的方法构建大鼠离体心脏停跳-再灌注模型。（2）以Powerlab系统连续记录不同时间点的血流动力学指标,对结果分析后用心率（Heart rate,HR）、左室内压最大上升速率(Maximal rise rate of left ventricularpressure,+dp/dtmax)、左心室发展压（Left ventricular development pressure,LVDP）等指标来评价离体心脏的心功能。采用称重法收集并记录不同时间点的冠脉流量（Coronary flow,CF）。采用生化分析仪测定停跳-再灌注灌流液中的肌酸激酶同工酶（Creatine kinase isoenzyme,CK-MB）、心肌肌钙蛋白T（Cardiac troponin T,c Tn T）、乳酸脱氢酶（Lactate dehydrogenase,LDH）浓度。（3）采用过氧化氢（H2O2）构建H9c2心肌细胞氧化应激模型。通过对细胞活力、LDH释放、细胞的凋亡和坏死水平以及细胞核形态的检测,评价KP-4抗氧化应激损伤的作用。通过检测细胞内活性氧（Reactive Oxygen Species,ROS）含量、超氧化物歧化酶（Superoxide Dismutase,SOD）活性和丙二醛（Malondialdehyde,MDA）含量来评价KP-4的抗氧化能力。（4）采用Western Blot检测Bcl-2/Bax,p-S473 Akt/Akt,p-GSK-3β/GSK-3β和HK-II的变化情况,探究KP-4预处理抑制H9c2氧化应激损伤的可能机制。通过JC-1染色和激光共聚焦显微镜,检测线粒体膜电位水平。结果（1）KP-4能够改善缺血再灌注后心脏的血流动力学参数(CF,+dp/dtmax和LVDP),并且能够降低停跳-再灌注后灌注液中的心肌酶（CK-MB、c Tn T和LDH）浓度。（2）KP-4预处理能够抑制H2O2诱导的H9c2心肌细胞活力的降低和LDH的释放,维持细胞和细胞核正常的形态,同时使细胞的凋亡和坏死水平降低。此外,KP-4能够降低氧化应激时H9c2细胞内的ROS水平和MDA浓度,同时提高SOD活性。（3）KP-4预处理上调了H9c2心肌细胞Akt和GSK-3β的磷酸化水平,并促进了HK-II与线粒体的结合,同时提高线粒体膜电位和Bcl-2/Bax的水平。（4）LY290004（PI3K抑制剂,特异性的抑制Akt信号通路的信号传导）抑制Akt的磷酸化则消除了KP-4的这种作用,使细胞活力和GSK-3β磷酸化水平降低。结论:（1）KP-4能够改善离体大鼠心肌缺血再灌注的心功能。（2）KP-4抑制心肌缺血再灌注损伤的作用可能与其抑制心肌细胞氧化应激损伤有关。KP-4可以有效抑制H2O2诱导的H9c2心肌细胞氧化应激损伤,而Akt/GSK-3β信号通路和HK-II途径参与了KP-4对心肌细胞的保护作用。
二、阿魏酸钠对心肌缺血/再灌注损伤在体大鼠心功能的作用（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、阿魏酸钠对心肌缺血/再灌注损伤在体大鼠心功能的作用（论文提纲范文）
（1）龙牙楤木总皂苷抗MIRI机制研究及中成药防治MIRI的系统评价（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 上篇 文献综述 |
| 综述一 心肌缺血再灌注损伤与内质网应激 |
| (一) 内质网应激的主要路径 |
| (二) 内质网应激在心肌缺血再灌注损伤中的作用机制 |
| 参考文献 |
| 综述二 线粒体功能障碍与心肌缺血再灌注损伤的研究进展 |
| (一) 线粒体形态动力学异常 |
| (二) 线粒体能量代谢障碍 |
| (三) 活性氧产生过量 |
| (四) 钙稳态异常 |
| (五) 线粒体膜通透性改变 |
| 参考文献 |
| 综述三 心肌缺血再灌注损伤的中西医结合研究进展 |
| 1.中药复方汤剂 |
| 2.中成药 |
| 3.中药单体及有效成分 |
| 4.结语与展望 |
| 参考文献 |
| 下篇 实验研究 |
| 前言 |
| 实验一 龙牙楤木总皂苷对心肌缺血再灌注损伤的保护作用 |
| 1 实验器材和材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 小结 |
| 实验二 基于线粒体功能障碍探讨龙牙楤木总皂苷对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用 |
| 1 主要仪器和材料 |
| 2 实验方法 |
| 3.结果 |
| 4 小结 |
| 实验三 基于内质网应激探讨龙牙楤木总皂苷对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用 |
| 1 主要实验材料和仪器 |
| 2 实验方法 |
| 3 结果 |
| 4 小结 |
| 讨论 |
| 1 研究的临床意义 |
| 2 龙牙楤木总皂苷抗MIRI的研究基础 |
| 3 大鼠心肌缺血再灌注损伤模型的选择 |
| 4 研究结果分析 |
| 参考文献 |
| 临床研究 中成药治疗心肌缺血再灌注损伤的系统评价 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4.结论 |
| 参考文献 |
| 结语 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（2）阿魏酸钠通过ERK信号通路干预大鼠心肌缺血再灌注损伤的实验研究（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 观察指标 |
| 1.2.1 血浆心肌肌钙蛋白Ⅰ（c TnⅠ）、氨基末端脑钠肽前体（NT-pro BNP）浓度 |
| 1.2.2 免疫组织化学法检测心肌中VEGF及微血管密度（MVD）的表达 |
| 1.2.3 Western blotting方法检测心肌p-ERK1/2信号蛋白 |
| 1.2.4 心肌梗死面积的测定 |
| 1.2.5 心肌组织病理学改变 |
| 1.3 统计学方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 4组血浆c TnⅠ、NT-pro BNP水平比较 |
| 2.2 4组心肌组织VEGF蛋白及MVD的变化比较 |
| 2.3 4组CD31阳性表达结果比较 |
| 2.4 4组心肌组织p-ERK1/2信号蛋白变化比较 |
| 2.5 4组大鼠心肌梗死面积比较 |
| 2.6 4组心肌组织病理学改变 |
| 3 讨论 |
（3）葛根与粉葛抗MIRI所致心律失常的疗效与机制研究（论文提纲范文）
| 致谢 |
| 中文摘要 |
| abstract |
| 缩略词 |
| 引言 |
| 第1章 葛根与粉葛对MIRI致大鼠心律失常的保护作用及机制研究 |
| 1 引言 |
| 2 材料与设备 |
| 2.1 PLR、PTR提取 |
| 2.2 仪器设备 |
| 2.3 药品及试剂 |
| 2.4 试验动物 |
| 3 试验方法 |
| 3.1 溶液配制 |
| 3.2 试验动物分组 |
| 3.3 建立I/R模型 |
| 3.4 心电图评分 |
| 3.5 大鼠心肌肥厚指数 |
| 3.6 大鼠心肌缺血危险区面积占比 |
| 3.7 Elisa试剂盒检测大鼠血清生化指标 |
| 3.8 Elisa试剂盒检测大鼠心脏生化指标 |
| 3.9 大鼠心脏组织病理学检测 |
| 3.10 TUNEL检测大鼠心脏细胞凋亡 |
| 3.11 免疫组织化学检测心脏缝隙连接蛋白43(Connexin43,Cx43)的表达 |
| 3.12 Western Blot检测大鼠心脏MAPK p38和NFκB p65 表达 |
| 4 统计学处理 |
| 5 结果 |
| 5.1 葛预处理对I/R大鼠心电图变化的影响 |
| 5.2 葛预处理对I/R大鼠心肌肥厚指数的影响 |
| 5.3 葛预处理对I/R大鼠心脏缺血危险区面积占比的影响 |
| 5.4 葛预处理对I/R大鼠血清及心肌组织中生化指标的影响 |
| 5.5 H-E染色检测葛预处理对I/R大鼠心脏病理变化的影响 |
| 5.6 Masson染色检测葛预处理对I/R大鼠心肌组织纤维化的影响 |
| 5.7 TUNEL检测葛预处理对I/R大鼠心肌细胞凋亡的影响 |
| 5.8 葛预处理对I/R大鼠心脏缝隙连接蛋白Cx43 表达的影响 |
| 5.9 Western Blot检测葛预处理对I/R大鼠心脏MAPK p38和NFκB p65 的影响 |
| 6 讨论 |
| 第2章 葛根与粉葛IAF、MS对 H9c2 细胞OGD/R损伤的保护作用及机制研究 |
| 1 引言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 仪器设备 |
| 2.2 主要药物与试剂 |
| 2.3 溶液配制 |
| 2.4 葛根与粉葛的IAF和MS的制备与检测 |
| 2.5 H9c2 细胞分组 |
| 2.6 建立(Oxygen-Glucose Deprivation/ Reoxygenation,OGD/R)损伤模型 |
| 2.7 Pro和 Pue浓度筛选 |
| 2.8 IAF和 MS浓度对H9c2 细胞存活率的影响 |
| 2.9 IAF和 MS对 OGD/R诱导H9c2 细胞损伤的影响 |
| 2.10 IAF和 MS预处理对H9c2 细胞SOD活性和 LDH活性的影响 |
| 2.11 Western Blot检测IAF和 MS预处理对H9c2 细胞MAPK p38和NFκB p65 蛋白表达的影响 |
| 2.12 统计学处理 |
| 3 结果 |
| 3.1 Q-TOF检测葛根与粉葛的IAF和 MS |
| 3.2 OGD/R模型对H9c2 细胞存活率的影响 |
| 3.3 Pro和 Pue浓度筛选 |
| 3.4 IAF或 MS对 H9c2 细胞活力的影响 |
| 3.5 葛根IAF和 MS预处理对OGD/R诱导H9c2 细胞损伤的影响 |
| 3.6 IAF和 MS预处理对H9c2 细胞SOD活性和 LDH活性的影响 |
| 3.7 IAF和 MS预处理对H9c2 细胞MAPK p38和NFκB p65 蛋白表达的影响 |
| 3.8 IAF和MS比较 |
| 4 讨论 |
| 第3章 基于系统药理学方法和分子对接技术预测葛抗心律失常的机制 |
| 1 引言 |
| 2 方法 |
| 2.1 数据库与软件 |
| 2.2 RP活性成分获取与靶点筛选 |
| 2.3 心律失常靶点的获取与筛选 |
| 2.4 RP-活性成分-靶点-心律失常网络构建 |
| 2.5 RP治疗心律失常蛋白相互作用(PPI)网络构建 |
| 2.6 RP治疗心律失常靶点的GO和 KEGG富集分析 |
| 2.7 RP治疗心律失常的重要活性成分与核心靶点对接 |
| 3 结果 |
| 3.1 RP中潜在活性成分获取与靶点筛选 |
| 3.2 RP-活性成分-靶点-心律失常网络构建 |
| 3.3 RP治疗心律失常的PPI网络绘制 |
| 3.4 RP治疗心律失常的靶点GO富集分析 |
| 3.5 RP治疗心律失常的靶点KEGG通路富集分析 |
| 3.6 RP治疗心律失常的重要活性成分与核心靶点对接 |
| 4 讨论 |
| 结论 |
| 总结 |
| 创新与不足 |
| 文献综述 第4章 再灌注心律失常及中药防治的研究进展 |
| 1 引言 |
| 2 再灌注心律失常机制 |
| 2.1 钙超载 |
| 2.2 线粒体能量代谢障碍 |
| 2.3 氧化应激 |
| 2.4 炎症机制 |
| 2.5 细胞凋亡、坏死和自噬 |
| 3 中药及其制剂防治心律失常 |
| 3.1 中药单味药及复方 |
| 3.2 中药有效成分 |
| 4 结语 |
| 参考文献 |
| 作者简介 |
（4）三七三醇皂苷抗心肌缺血再灌注损伤机制研究及三七总皂苷对PCI心肌保护作用的系统评价（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 第一部分 文献综述 |
| 综述一 心肌缺血再灌注损伤与PI3K/Akt信号通路 |
| (一) PI3K/Akt信号通路的结构与功能 |
| (二) PI3K/Akt信号通路的研究进展 |
| (三) 小结 |
| 参考文献 |
| 综述二 三七总皂苷与三七三醇皂苷抗心肌缺血再灌注损伤研究进展 |
| (一) 三七总皂苷抗心肌缺血再灌注损伤机制的研究进展 |
| (二) 三七三醇皂苷抗心肌缺血再灌注损伤机制的研究进展 |
| (三) 小结 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 第二部分 实验研究 三七三醇皂苷抗心肌缺血再灌注损伤的机制研究 |
| 1 实验材料 |
| 2 药品及试剂的配置 |
| 实验一 探讨不同剂量PTS对大鼠离体心脏MIRI的保护作用 |
| 1 方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 参考文献 |
| 实验二 基于PI3K/Akt信号通路探讨PTS对MIRI的作用 |
| 1 方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 参考文献 |
| 第三部分 临床研究 三七总皂苷对PCI患者心肌保护作用的系统评价 |
| 1 方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 参考文献 |
| 结语 |
| 致谢 |
| 在学期间主要研究成果 |
（5）异莲心碱和人参皂苷Rb1的抗心律失常机制（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 综述 炙甘草汤和心速宁及两者活性成分的抗心律失常研究概况 |
| 参考文献 |
| 第二章 前言 |
| 第三章 材料和方法 |
| 3.1 家兔左心室肌细胞的制备 |
| 3.2 实验中所使用的溶液和试剂 |
| 3.2.1 药品试剂 |
| 3.2.2 实验中用到的溶液的配方 |
| 3.3 离子通道电流和动作电位的记录方法 |
| 3.3.1 锋钠电流的记录 |
| 3.3.2 晚钠电流的记录 |
| 3.3.3 L型钙电流的记录 |
| 3.3.4 内向整流钾电流的记录 |
| 3.3.5 延迟整流钾电流的记录 |
| 3.3.6 动作电位的记录 |
| 3.4 心室肌细胞钙瞬变的记录方法 |
| 3.5 离体心脏心电图记录方法 |
| 3.6 数据分析 |
| 第四章 结果 |
| 4.1 药物的筛选 |
| 4.2 异莲心碱的抗心律失常机制 |
| 4.2.1 异莲心碱对锋钠电流的作用 |
| 4.2.2 异莲心碱对ATX-II诱导增大的晚钠电流的作用 |
| 4.2.3 异莲心碱对L型钙电流的作用 |
| 4.2.4 异莲心碱对内向整流钾电流和延迟整流钾电流的作用 |
| 4.2.5 异莲心碱对动作电位、早期后除极和晚期后除极的作用 |
| 4.3 人参皂苷Rb1 的抗心律失常机制 |
| 4.3.1 人参皂苷Rb1 对锋钠电流的作用 |
| 4.3.2 人参皂苷Rb1 对L型钙电流的作用 |
| 4.3.3 人参皂苷Rb1 对内向整流钾电流和延迟整流钾电流的作用 |
| 4.3.4 人参皂苷Rb1 对动作电位和晚期后除极的作用 |
| 4.3.5 人参皂苷Rb1 对缺氧-复氧情况下细胞内钙的影响 |
| 4.3.6 人参皂苷Rb1 对缺血再灌注损伤导致的室性心律失常的作用 |
| 第五章 讨论 |
| 第六章 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 附录1 攻读博士学位期间取得的科研成果 |
| 附录2 攻读博士学位期间参加的科研项目 |
（6）基于ATF3/MAP2K3/p38 MAPK通路探究活血益气组分中药防治心梗后大鼠心室重构作用机制（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 第一部分 文献综述 |
| 综述一 急性心肌梗死后心室重构的中医病因病机分析 |
| 参考文献 |
| 综述二 心室重构与炎症相关的研究进展 |
| 参考文献 |
| 综述三 活血益气组分中药防治心室重构的研究进展 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 第二部分 实验研究 |
| 第一章 活血益气组分配伍中药对心肌梗死后大鼠心脏功能和结构影响的实验研究 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第二章 活血益气组分配伍中药对心肌梗死后大鼠心脏ATF3/MAP2K3/p38 MAPK信号通路影响的实验研究 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第三章 活血益气组分配伍中药对心肌梗死后大鼠心脏能量代谢影响的实验研究 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 在校期间主要研究成果 |
| 个人简历 |
（7）基于miR-22-5p/RAP1/ERK信号通路探讨芦丁对吡柔比星所致心肌损伤的保护作用（论文提纲范文）
| 前言 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 中英文缩写对照表 |
| 第1章 绪论 |
| 1.1 芦丁的药理学作用 |
| 1.1.1 抗氧化作用 |
| 1.1.2 抗炎作用 |
| 1.1.3 抗肿瘤作用 |
| 1.1.4 神经保护作用 |
| 1.1.5 糖尿病相关并发症的治疗作用 |
| 1.1.6 心脏保护作用 |
| 1.2 miRNAs与心脏发育及相关疾病的关系 |
| 1.2.1 miRNAs在心脏发育中的作用 |
| 1.2.2 miRNAs在心血管疾病中的作用 |
| 1.2.2.1 miRNAs与心肌肥厚 |
| 1.2.2.2 miRNAs与心肌纤维化 |
| 1.2.2.3 miRNAs与心律失常 |
| 1.2.2.4 miRNAs与心肌缺血再灌注损伤 |
| 1.2.2.5 miRNAs与心肌细胞凋亡 |
| 1.2.2.6 miRNAs与蒽环类药物所致的心肌损伤 |
| 1.3 与化疗药所致心肌损伤相关的常见信号通路 |
| 1.3.1 MAPK信号通路 |
| 1.3.1.1 p38 MAPK信号通路 |
| 1.3.1.2 JNK信号通路 |
| 1.3.1.3 ERK信号通路 |
| 1.3.2 NF-κB信号通路 |
| 1.3.3 PI3K/AKT信号通路 |
| 1.3.4 AMPK信号通路 |
| 1.3.5 钙离子信号通路 |
| 第2章 芦丁保护吡柔比星所致大鼠心肌损伤的miRNA芯片生物信息学分析及miR225p/RAP1/ERK信号通路构建 |
| 2.1 实验方法 |
| 2.1.1 差异miRNA的筛选 |
| 2.1.2 miR225p的靶基因预测和GO分析 |
| 2.1.3 KEGG通路分析及信号通路构建 |
| 2.2 实验结果 |
| 2.2.1 miRNA筛选结果 |
| 2.2.2 miR225p的靶基因预测及功能富集结果 |
| 2.2.3 miR225p/RAP1/ERK信号通路的构建 |
| 2.3 本章小结 |
| 第3章 miR225p/RAP1/ERK信号通路在芦丁改善吡柔比星所致大鼠心肌损伤中的介导作用 |
| 3.1 实验材料 |
| 3.1.1 药品及试剂 |
| 3.1.2 实验仪器 |
| 3.1.3 主要溶液配制 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.2.1 实验动物分组及处理 |
| 3.2.2 大鼠心电图和心功能参数检测 |
| 3.2.3 心脏取材 |
| 3.2.4 HE染色切片制备 |
| 3.2.4.1 石蜡切片制备 |
| 3.2.4.2 HE染色 |
| 3.2.5 qPCR检测大鼠心肌组织中miR225p和RAP1A m RNA的表达 |
| 3.2.5.1 qPCR检测大鼠心肌组织中miR225p的表达 |
| 3.2.5.2 qPCR检测大鼠心肌组织中RAP1A m RNA的表达 |
| 3.2.6 Western blot检测大鼠心肌组织中相关信号通路蛋白的表达 |
| 3.2.6.1 蛋白样品制备 |
| 3.2.6.2 聚丙烯酰胺凝胶电泳 |
| 3.2.7 统计学分析 |
| 3.3 实验结果 |
| 3.3.1 一般状态观察 |
| 3.3.2 RUT对THP所致心肌损伤大鼠心电图和心功能的影响 |
| 3.3.3 RUT对THP所致心肌损伤大鼠组织形态学的影响 |
| 3.3.4 RUT对THP所致心肌损伤大鼠心肌组织中miR225p和RAP1A m RNA表达的影响 |
| 3.3.5 RUT对THP所致心肌损伤大鼠心肌组织中相关信号通路蛋白的影响 |
| 3.4 本章小结 |
| 第4章 miR225p在吡柔比星处理大鼠H9c2心肌细胞损伤中的作用及机制研究 |
| 4.1 实验材料 |
| 4.1.1 药品及试剂 |
| 4.1.2 实验仪器 |
| 4.1.3 主要溶液配制 |
| 4.2 实验方法 |
| 4.2.1 细胞培养 |
| 4.2.1.1 细胞复苏 |
| 4.2.1.2 细胞传代 |
| 4.2.1.3 细胞冻存 |
| 4.2.2 RUT对THP处理的H9c2细胞中miR225p和RAP1Am RNA的影响 |
| 4.2.2.1 细胞分组及处理 |
| 4.2.2.2 qPCR检测H9c2细胞中miR225p和RAP1Am RNA表达 |
| 4.2.3 miR225p对RAP1A靶向调控作用的验证 |
| 4.2.3.1 细胞转染 |
| 4.2.3.2 细胞分组及处理 |
| 4.2.3.3 qPCR检测转染miR225p后H9c2细胞中miR225p和RAP1A m RNA的表达 |
| 4.2.4 miR225p对THP处理的H9c2细胞中ROS水平、细胞凋亡及RAP1/ERK信号通路相关蛋白表达的影响 |
| 4.2.4.1 细胞转染 |
| 4.2.4.2 细胞分组及处理 |
| 4.2.4.3 原位装载DCFH-DA探针检测H9c2细胞中的ROS含量 |
| 4.2.4.4 TUNEL实验检测H9c2细胞凋亡 |
| 4.2.4.5 Western blot检测H9c2细胞中RAP1/ERK信号通路中相关蛋白的表达 |
| 4.2.5 统计学分析 |
| 4.3 实验结果 |
| 4.3.1 RUT对THP处理H9c2细胞中miR225p和RAP1Am RNA表达的影响 |
| 4.3.2 转染miR225p对miR225p和RAP1A m RNA表达的影响 |
| 4.3.3 miR225p对THP处理H9c2细胞中ROS水平、细胞凋亡和RAP1/ERK信号通路相关蛋白表达的影响 |
| 4.3.3.1 miR225p对THP处理H9c2细胞中ROS水平的影响 |
| 4.3.3.2 miR225p对THP处理H9c2细胞凋亡的影响 |
| 4.3.3.3 miR225p对THP处理H9c2细胞中RAP1/ERK信号通路相关蛋白表达的影响 |
| 4.4 本章小结 |
| 第5章 讨论 |
| 5.1 吡柔比星所致大鼠心肌/H9c2细胞损伤模型的复制 |
| 5.1.1 动物模型 |
| 5.1.2 细胞模型 |
| 5.2 RUT改善THP所致的大鼠心肌/H9c2细胞损伤 |
| 5.3 RUT改善THP所致大鼠心肌损伤miRNA芯片的生物信息学分析和芯片结果验证 |
| 5.3.1 miRNA芯片的生物信息学分析 |
| 5.3.2 miR225p的芯片结果验证 |
| 5.4 基于miR225p/RAP1/ERK信号通路探讨RUT对THP所致心肌损伤的保护作用 |
| 5.4.1 miR225p的生物学作用 |
| 5.4.2 miR225p靶向调控RAP1A |
| 5.4.3 RUT通过miR225p/RAP1/ERK信号通路改善THP所致的心肌损伤 |
| 第6章 结论 |
| 创新点 |
| 参考文献 |
| 作者简介及在学期间所取得的科研成果 |
| 致谢 |
（8）当归醇提物对SHR血压及靶器官的影响及分子机制探讨（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTACT |
| 前言 |
| 参考文献 |
| 第一章 当归防治高血压病的研究现状 |
| 1 资料与方法 |
| 1.1 文献来源 |
| 1.2 纳入排除标准 |
| 1.3 分析方法 |
| 1.4 结局指标 |
| 1.5 统计分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 纳入研究的基本特征 |
| 2.2 Evidence Mapping |
| 3 讨论 |
| 3.1 当归及其复方制剂的有效性 |
| 3.2 当归及其复方制剂的安全性 |
| 3.3 纳入研究质量 |
| 3.4 当归的应用前景 |
| 3.5 优势与局限性 |
| 4 结论 |
| 参考文献 |
| 第二章 当归醇提物的制备及其质量控制 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 当归醇提物的制备 |
| 1.2.2 阿魏酸含量的测定 |
| 1.2.3 当归醇提物中阿魏酸含量测定 |
| 2 结果 |
| 2.1 系统适用性 |
| 2.2 标准曲线与线性范围 |
| 2.3 精密度、相对回收率和稳定性 |
| 2.4 阿魏酸含量测定 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 参考文献 |
| 第三章 当归醇提物对SHR血压及靶器官的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.3 统计学方法 |
| 2 实验结果 |
| 2.1 当归醇提物降低SHR血压的疗效评价 |
| 2.2 当归醇提物对SHR肝、肾功能影响的初步评价 |
| 3 讨论 |
| 3.1 当归醇提物逆转心肌重构作用机制 |
| 3.2 当归醇提物改善内皮功能的作用 |
| 4 结论 |
| 参考文献 |
| 第四章 网络药理学探讨当归防治高血压机制 |
| 1 资料方法 |
| 1.1 当归活性成分筛选 |
| 1.2 当归活性成分作用靶点预测 |
| 1.3 高血压疾病靶点预测 |
| 1.4 活性成分-靶点-疾病网络构建 |
| 1.5 靶蛋白互作网络构建 |
| 1.6 KEGG信号通路与GO生物过程富集分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 当归活性成分筛选 |
| 2.2 当归活性成分-靶点-疾病靶点网络构建 |
| 2.3 潜在靶点蛋白互作(PPI)网络图 |
| 2.4 当归治疗高血压KEGG信号通路富集分析 |
| 2.5 当归治疗高血压GO生物过程富集分析 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 参考文献 |
| 第五章 当归醇提物降低SHR血压及靶器官保护的分子机制 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 形态学评估当归醇提物对SHR模型靶器官的影响 |
| 1.2.2 当归醇提物对SHR血清IL-6和CRP的影响 |
| 1.2.3 当归醇提物对SHR血清Th17/Treg比例的影响 |
| 1.2.4 p38/MAPK通路相关因子的检测 |
| 1.2.5 统计学方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 对SHR模型肾组织HE染色的影响 |
| 2.2 对SHR模型IL-6和CRP表达的影响 |
| 2.3 对SHR模型Th17和Treg表达的影响 |
| 2.4 对SHR模型IL17和IL-23表达的影响 |
| 2.5 对SHR模型IL-10和TGFβ1表达的影响 |
| 2.6 Th17和Treg 转录因子RORγt、FoxP3的表达 |
| 2.7 对SHR模型p38、p-p38、SGK1、FoxO1、p-FoxO1和IL-23R表达的影响 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 参考文献 |
| 全文结论 |
| 展望与不足 |
| 附录 |
| 附录1 中英文缩略词对照表 |
| 附件2 系统评价检索策略 |
| 附件3 系统评价纳入文献基本信息 |
| 文献综述 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 在学期间主要研究成果 |
（9）亚砷酸钠保护心肌缺血再灌注损伤的机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略词表 |
| 1 前言 |
| 2 实验材料 |
| 2.1 实验动物 |
| 2.2 细胞株 |
| 2.3 主要仪器设备 |
| 2.4 实验试剂 |
| 2.5 主要试剂的配置 |
| 3 实验方法 |
| 3.1 细胞培养 |
| 3.2 小鼠骨髓单核巨噬细胞(BMDM )的培养 |
| 3.3 心肌缺血再灌注损伤模型的建立 |
| 3.4 大鼠心脏TTC与伊文氏蓝双染 |
| 3.5 大鼠心脏超声采集 |
| 3.6 大鼠动脉血压的测量 |
| 3.7 蛋白质免疫印迹(western blotting) |
| 3.8 RT-PCR |
| 3.9 pcDNA6-flag-hNLRP3质粒的构建 |
| 3.10 免疫荧光 |
| 3.11 IL-1β的检测 |
| 3.12 大鼠肝脏线粒体提取 |
| 3.13 线粒体呼吸实验 |
| 3.14 细胞缺氧复氧模拟实验 |
| 3.15 ROS的检测 |
| 3.16 统计方法 |
| 4 实验结果 |
| 4.1 亚砷酸钠减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤 |
| 4.2 体外心肌细胞的模拟再灌注实验中亚砷酸钠的作用 |
| 4.3 亚砷酸钠对线粒体呼吸的抑制作用 |
| 4.4 亚砷酸钠诱导产生细胞应激反应和血红素加氧酶-1高表达 |
| 4.5 亚砷酸钠抑制NLRP3炎症小体活化 |
| 5 讨论 |
| 6 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 心肌缺血再灌注损伤的研究进展 |
| 参考文献 |
| 个人简历 |
| 致谢 |
（10）KP-4对缺血再灌注损伤的心肌保护作用及其机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略词表 |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 心肌缺血再灌注损伤概述 |
| 1.2 心肌缺血再灌注损伤的病理机制和治疗措施研究现状 |
| 1.2.1 心肌缺血再灌注损伤的病理机制 |
| 1.2.2 心肌缺血再灌注损伤的治疗措施研究现状 |
| 1.3 氧化应激与心肌缺血再灌注损伤 |
| 1.3.1 ROS的产生与清除机制 |
| 1.3.2 氧化应激促进心肌缺血再灌注损伤的机制 |
| 1.4 线粒体死亡途径 |
| 1.5 RISK信号通路 |
| 1.5.1 Akt |
| 1.5.2 GSK-3β |
| 1.5.3 HK-II |
| 1.6 KP-4的相关研究进展 |
| 1.7 本课题的研究意义和研究内容 |
| 1.7.1 研究意义 |
| 1.7.2 研究内容 |
| 第二章 KP-4抗离体心肌缺血再灌注损伤的心脏保护作用 |
| 2.1 前言 |
| 2.2 实验材料 |
| 2.2.1 实验动物 |
| 2.2.2 实验仪器设备 |
| 2.2.3 主要药品和试剂 |
| 2.2.4 溶液配制 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 实验分组 |
| 2.3.2 大鼠离体心肌缺血再灌注模型的构建 |
| 2.3.3 大鼠离体心脏停跳-再灌注模型 |
| 2.3.4 血流动力学参数的测定 |
| 2.3.5 心肌酶的检测 |
| 2.3.6 统计学分析 |
| 2.4 实验结果 |
| 2.4.1 KP-4改善左前降支冠脉结扎再灌注模型大鼠心脏的收缩功能 |
| 2.4.2 KP-4改善停跳-再灌注模型大鼠心脏的收缩功能 |
| 2.4.3 KP-4降低停跳-再灌注模型大鼠的心肌酶含量 |
| 2.5 本章讨论 |
| 2.6 本章小结 |
| 第三章 KP-4 抑制H_2O_2诱导的H9c2 心肌细胞氧化应激损伤 |
| 3.1 前言 |
| 3.2 实验材料 |
| 3.2.1 细胞系及其来源 |
| 3.2.2 主要仪器设备 |
| 3.2.3 主要药品和试剂 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.3.1 H9c2心肌细胞的培养 |
| 3.3.2 实验分组 |
| 3.3.3 细胞的处理 |
| 3.3.4 细胞活力的检测 |
| 3.3.5 乳酸脱氢酶(LDH)释放的检测 |
| 3.3.6 H9c2细胞形态的观察 |
| 3.3.7 细胞核形态的观察 |
| 3.3.8 细胞凋亡和坏死的检测 |
| 3.3.9 细胞内活性氧化合物(ROS)的检测 |
| 3.3.10 细胞内超氧化物歧化酶(SOD)活性检测 |
| 3.3.11 细胞内丙二醛(MDA)含量检测 |
| 3.3.12 BCA法检测蛋白质浓度 |
| 3.3.13 统计学分析 |
| 3.4 实验结果 |
| 3.4.1 H_2O_2对H9c2细胞活力的影响 |
| 3.4.2 H_2O_2对H9c2 细胞LDH释放的影响 |
| 3.4.3 KP-4对H9c2细胞活力影响 |
| 3.4.4 KP-4 预处理抑制H_2O_2 诱导的H9c2 细胞活力的下降 |
| 3.4.5 KP-4 预处理抑制H_2O_2 诱导的H9c2 细胞LDH的释放 |
| 3.4.6 KP-4 预处理抑制H_2O_2 诱导的H9c2 细胞形态的改变 |
| 3.4.7 KP-4 预处理抑制H_2O_2 诱导的H9c2 细胞核形态的变化 |
| 3.4.8 KP-4预处理抑制氧化应激诱导的H9c2细胞凋亡和坏死 |
| 3.4.9 KP-4 预处理降低氧化应激时H9c2 细胞中的ROS水平 |
| 3.4.10 KP-4 预处理提高H9c2 细胞中的SOD的酶活性 |
| 3.4.11 KP-4 预处理显着降低H9c2 细胞中的MDA含量 |
| 3.5 本章讨论 |
| 3.6 本章小结 |
| 第四章 KP-4 通过Akt/GSK-3β信号通路和HK-II途径抑制氧化应激诱导的H9c2 细胞损伤 |
| 4.1 前言 |
| 4.2 实验材料与设备 |
| 4.2.1 细胞系及其来源 |
| 4.2.2 主要仪器设备 |
| 4.2.3 主要药品和试剂 |
| 4.3 实验方法 |
| 4.3.1 H9c2心肌细胞的培养 |
| 4.3.2 实验分组 |
| 4.3.3 细胞的处理 |
| 4.3.4 线粒体膜电位的检测 |
| 4.3.5 线粒体蛋白的提取 |
| 4.3.6 Western blot检测蛋白含量 |
| 4.3.7 统计学分析 |
| 4.4 实验结果 |
| 4.4.1 KP-4 上调H9c2 心肌细胞氧化应激时Akt的磷酸化水平 |
| 4.4.2 KP-4 抑制H9c2 心肌细胞氧化应激时GSK-3β的磷酸化水平的降低 |
| 4.4.3 KP-4 促进HK-II与线粒体的结合 |
| 4.4.4 KP-4抑制氧化应激诱导的H9c2心肌细胞线粒体膜电位下降 |
| 4.4.5 KP-4 调节Bcl-2/Bax水平 |
| 4.4.6 LY294002 抑制KP-4抗H9c2 细胞氧化应激损伤 |
| 4.5 本章讨论 |
| 4.6 本章小结 |
| 结论与展望 |
| 结论 |
| 创新之处 |
| 展望 |
| 参考文献 |
| 攻读硕士学位期间发表的论文 |
| 致谢 |
四、阿魏酸钠对心肌缺血/再灌注损伤在体大鼠心功能的作用（论文参考文献）
- [1]龙牙楤木总皂苷抗MIRI机制研究及中成药防治MIRI的系统评价[D]. 宋欣丽. 北京中医药大学, 2021
- [2]阿魏酸钠通过ERK信号通路干预大鼠心肌缺血再灌注损伤的实验研究[J]. 张博伦,王丽,胡雅光,林富,卢德永. 中国医学工程, 2021(07)
- [3]葛根与粉葛抗MIRI所致心律失常的疗效与机制研究[D]. 马嘉鑫. 江西中医药大学, 2021(01)
- [4]三七三醇皂苷抗心肌缺血再灌注损伤机制研究及三七总皂苷对PCI心肌保护作用的系统评价[D]. 文超. 北京中医药大学, 2021(01)
- [5]异莲心碱和人参皂苷Rb1的抗心律失常机制[D]. 刘志沛. 武汉科技大学, 2020(01)
- [6]基于ATF3/MAP2K3/p38 MAPK通路探究活血益气组分中药防治心梗后大鼠心室重构作用机制[D]. 马如风. 北京中医药大学, 2020(04)
- [7]基于miR-22-5p/RAP1/ERK信号通路探讨芦丁对吡柔比星所致心肌损伤的保护作用[D]. 秦梦. 吉林大学, 2020(08)
- [8]当归醇提物对SHR血压及靶器官的影响及分子机制探讨[D]. 魏惠平. 甘肃中医药大学, 2020(08)
- [9]亚砷酸钠保护心肌缺血再灌注损伤的机制研究[D]. 李敏. 郑州大学, 2020(02)
- [10]KP-4对缺血再灌注损伤的心肌保护作用及其机制研究[D]. 张晓锋. 广东工业大学, 2020(06)