一、球形芽孢杆菌和苏云金芽孢杆菌以色列亚种杀蚊毒素间的协同作用（论文文献综述）
周燕,朱英芝,姜明国[1]（2020）在《苏云金芽孢杆菌杀蚊菌株研究进展》文中认为苏云金芽孢杆菌作为生物杀虫剂已有近百年历史,其杀虫谱包括从鳞翅目、鞘翅目、膜翅目、双翅目到线虫甚至是癌症细胞,对农林业生产以及医学领域研究具有非常重要的作用。全球每年死于蚊媒疾病的数目惊人。本综述首先介绍了首个被发现对双翅目幼虫具有杀蚊活性的苏云金芽孢杆菌以色列亚种,详细叙述了该菌株的杀虫功能、菌株特点以及含有的多种杀虫毒蛋白基因;随后概述了报道的其他杀蚊菌株和杀蚊毒蛋白;还揭示了苏云金芽孢杆菌杀蚊菌株Cry/Cyt杀蚊毒蛋白的作用模式,为有关苏云金芽孢杆菌杀蚊菌株的研究提供借鉴。
孔浩然[2]（2020）在《苏云金芽孢杆菌内毒素CryIVD重组表达及灭蝇效果评估》文中研究表明长期以来,具有高效、速效、经济和使用方便的有机合成农药是养殖场赖以防蝇的最主要的手段,但是由于长时间、大量、长期使用有机合成灭虫剂,“3R”问题（resistance,resurgence,residue）也会随之而来,同时化学灭虫剂的作用也难以得到保证,甚者危害人类健康,污染环境。而生物型灭虫剂拥有低毒、易降解、对人畜无害、害虫不容易产生耐药性等特点,可满足生态学发展的需求,是未来新型杀虫剂研制的重要方向之一。近年来,生物型杀虫剂研制发展较为迅速、应用也较为广泛,尤其以苏云金芽孢杆菌为代表新型制剂正处于研发和应用阶段,其防虫原理是分泌的内毒素（伴胞晶体）具有胃毒素,害虫因此停止进食,最后因饥饿、神经紊乱、细胞壁破裂而死。苏云金芽孢杆菌以色列亚种最初用于杀虫主要是针对双翅目蚊的卵和幼虫,本实验意外发现该亚种的内毒素CryIVD基因对家蝇（尤其是对其蝇的卵）具有着较强的杀灭作用。本文参照NCBI GenBank 中已发布的目的基因序列（登录号EU124377.1）,采用软件Primer6.0设计用于扩增CryIVD基因的引物,并在两端引入限制性酶切位点。对增殖的苏云金芽孢杆菌以色列亚种提取基因组DNA,采用PCR技术扩增CryIVD基因,将PCR产物与pMD19-T载体连接构建克隆质粒,然后进行酶切鉴定并测定序列,并进行同源性分析;将目的进行连接至pGEX-4T-1原核表达载体中,构建重组质粒pGEX-4T-CryIVD,经PCR鉴定为阳性克隆后,并对其采用IPTG诱导表达,表达产物经SDS-PAGE和免疫印迹技术进行鉴定;利用重组表达CryIVD在体外开展了急性毒理试验,评估对家蝇的杀灭效果。结果表明:成功扩增出目的基因,其大小为660 bp。序列分析显示,其与Bacillus thuringiensis strain DAB-Bt2 Cry4d gene同源性最高,达100%,进化树分析也显示其与Bacillus thuringiensis strain DAB-Bt2 Cry4d gene 在遗传距离上最为接近;质粒pGEX-4T-CryIVD经IPTG诱导后,可表达出目的蛋白,其大小约为51kDa融合蛋白;体外毒性试验结果表明:CryIVD蛋白对蝇卵的杀灭效果较好,其LD50可达7.87×107cells/g;而对家蝇成虫的杀灭效果一般,其LD50为6.30×105cells/只。由此可见,重组表达的CryIVD对家蝇的卵具有良好的杀灭作用,是一种具有潜在性地可替代化学药物灭蝇方法。
高元,丁露,郭青云,谭小敏,谢青华,王子卓,戴小华[3]（2020）在《杀致倦库蚊幼虫芽孢杆菌的分离与功效研究》文中认为从陡水湖、五指峰、阳明山、赣南师范大学校园和井冈山采集土壤样本103份,采用醋酸钠-抗生素法并结合形态学观察和生物测定的方法,分离得到对致倦库蚊幼虫有毒性的芽孢杆菌菌株52株,有毒株占分离菌株总数的32.70%,其中获得高毒力菌株6株.对6株高毒力菌株进行深入研究,生物测定结果表明6株分离菌株对致倦库蚊幼虫LC50值在0.69～1.18μL/mL之间,都可以作为潜在的杀蚊幼微生物资源.光学显微镜观察发现伴胞晶体形态以方形晶体为主.通过16S rDNA序列比对鉴定其种属类型,结果表明6株菌均归为苏云金芽孢杆菌（Bacillus thuringiensis）.SDS-PAGE结果发现6株菌株均出现了明显的晶体蛋白条带.该研究结果不仅可丰富杀蚊微生物菌种资源库,还对控制蚊媒传染病爆发具有重要的理论和应用价值.
王帆帆[4]（2019）在《Bt杀虫蛋白原核表达及对异迟眼蕈蚊的杀虫活性》文中研究表明本试验对8株分离自江苏省紫金山土壤的野生苏云金芽孢杆菌（Bacillus thuringiensis,Bt）进行筛选后,得到1株对食用菌异迟眼蕈蚊（Bradysia difformis Frey）有较好杀虫活性的Bt菌株23-5。同时,对该菌株进行了形态鉴定、生理生化鉴定、16S rDNA鉴定和杀虫蛋白基因型鉴定等研究,并对该菌株含有的杀虫蛋白基因进行了原核表达,以期为食用菌Bt微生物农药的开发和应用提供理论依据。具体研究成果如下:1.通过胃毒法测定了8个Bt菌株对异迟眼蕈蚊的室内杀虫活性,结果表明8个Bt菌株中对异迟眼蕈蚊的校正死亡率最高可达84.48%（23-5菌株）,最低为43.11%。采用抑菌圈法测定了Bt菌株对平菇、毛木耳、茶树菇和双孢菇四种食用菌菌丝生长的影响,发现8个Bt菌株均减缓了四种食用菌菌丝生长速度,但最终菌丝仍然可以盖过Bt菌落继续生长。故选择校正死亡率最高的菌株23-5进行以下试验。2.对菌株23-5进行分类鉴定时主要采用形态鉴定、生理生化鉴定和16S rDNA鉴定三种鉴定方法,同时采用PCR-RFLP法确定菌株23-5含有的杀虫蛋白类型。结果表明该菌株能够产生圆形或不规则形晶体,生理生化鉴定及16S rDNA鉴定结果均显示该菌株与苏云金芽孢杆菌最为接近。PCR-RFLP结果显示该菌株含有的杀虫蛋白基因型组合为cry4/10+cry11+cyt1+cyt2。所以确认该菌株属于苏云金芽孢杆菌（Bt）3.以NCBI上公布的与cry4B、cry10、cry11、cyt1、cyt2五种杀虫蛋白基因相关信息为依据,扩增菌株23-5中各杀虫蛋白基因片段,结果显示23-5中含有的cry4B、cry10、cry11、cyt1、cyt2基因序列的长度分别为1470bp、2043bp、1941bp、750bp、792pb。各基因的克隆载体和表达载体分别构建成功后,进行PCR验证和双酶切验证。各杀虫毒蛋白基因的生物信息学分析表明Cry4Ba、Cry10Aa、Cry11Aa和Cyt2Ba蛋白均为亲水性蛋白,Cyt1Aa蛋白为疏水性蛋白,分别得到其氨基酸组成、理化性质和保守结构域。4.将各杀虫蛋白基因构建成功的表达载体进行蛋白表达和纯化,IPTG诱导表达后,12%SDS-PAGE结果表明杀虫蛋白Cry4B、Cry10、Cry11主要存在于表达菌株的沉淀中,呈包涵体形式,恢复其生物活性需通过变复性的方式,再进行融合蛋白的Ni柱亲和纯化;目标蛋白Cyt2主要存在于上清液,呈可溶形式表达,可直接进行融合蛋白的Ni柱亲和纯化;目标蛋白Cyt1表达不明显。融合蛋白Cry4B、Cry10、Cry11和Cyt2表达的大小分别为70KD、84KD、88kD和70kD。5.分别提取各工程菌株的目标蛋白,用Brandford法测定蛋白浓度,进行各目标蛋白的室内毒力测定。各蛋白浓度为250 ng/mL时,蛋白Cyt2对异迟眼蕈蚊的杀虫活性最高,校正死亡率达70.18%;蛋白Cry4B、Cry10、Cry11对异迟眼蕈蚊的杀虫活性较低,三者之间无显着性差异,校正死亡率为33.33-35.09%。
李超峰[5]（2018）在《不同添加物对苏云金芽孢杆菌杀虫活性的增效作用研究进展》文中指出苏云金芽孢杆菌（Bacillius thuringiensis,Bt）制剂是当前应用最广、最有效的生物杀虫剂之一,因其对多种昆虫具有特异性杀虫活性,而被广泛用于农林业和公共卫生等领域的害虫防治,但田间施用后,其速效性差、持效期短和防效不稳定等弊端限制了其进一步的推广。将Bt制剂与增效物质（剂）、因子混合使用以提高其杀虫活性和田间防效稳定性,是最快速、有效的途径之一,因而国内外对此开展了广泛而深入的研究。主要介绍了化学添加剂、化学杀虫剂和生物杀虫剂等添加物对Bt制剂杀虫活性的增效作用研究进展,并探讨了增效物质（剂）、因子的开发和应用前景,以期为开发安全、高效的Bt制剂的增效物质（剂）、因子提供一定的参考。
孙强,杨丽丽[6]（2014）在《Mtx1和Cry4Ba毒蛋白基因工程研究进展》文中提出球形芽孢杆菌（Bacillus sphaericuss,Bs）Mtx1和苏云金芽孢杆菌以色列亚种（Bacillus thuringiensis israelens,Bti）Cry4Ba是主要的杀蚊毒蛋白。通过对Mtx1毒蛋白杀蚊的作用机理,Cry4Ba毒蛋白的结构与作用机理的介绍,综述Mtx1毒蛋白和Cry4Ba毒蛋白基因工程研究进展,并对Mtx1毒蛋白和Cry4Ba毒蛋白的未来研究进行了思考。
苏天运[7]（2014）在《蚊虫对微生物和昆虫生长调节剂杀幼剂的抗药性及其管理》文中指出微生物和昆虫生长调节剂杀幼剂因具有相对靶生物特异性与环境保护理念越来越广泛用于蚊虫控制。该文回顾了这些杀虫剂的作用原理、在蚊虫控制方面的使用概况、抗药性发展及管理的策略与措施。涉及到的杀虫剂包括天然微生物杀虫剂苏云金杆菌以色列变种、球形芽孢杆菌、刺糖多孢菌多杀菌素,以及人工合成的昆虫生长调节剂如烯虫酯、吡丙醚和除虫脲。抗药性发展的预防和控制是可持续性蚊虫综合治理成功的关键之一。
杨丽丽[8]（2014）在《苏云金芽孢杆菌和球形芽孢杆菌主要杀蚊毒蛋白的克隆及表达》文中研究表明Cry4Aa、Cry4Ba是苏云金芽孢杆菌以色列亚种在芽孢时期产生的毒蛋白，Cry4Aa蛋白的分子量为130Kda，Cry4Ba蛋白的分子量为128Kda；Mtx1、Mtx2、Mtx3是球形芽孢杆菌SSII-1在营养期产生的毒蛋白，Mtx1蛋白的分子量为100Kda，Mtx2蛋白的分子量为31.8Kda，Mtx3蛋白的分子量为35.8Kda。为了进一步了解Cry4Aa、Cry4Ba、 Mtx1、Mtx2、Mtx3蛋白的特性，本文参照已发布NCBI的GenBank目的基因序列，采用软件Primer5设计Cry4Aa、Cry4Ba、Mtx1、Mtx2、Mtx3基因扩增引物，并加入酶切位点序列。以苏云金芽孢杆菌以色列亚种的质粒和球形芽孢杆菌SSII-1的染色体为模板，进行PCR扩增，将PCR产物与PMD18-T载体连接构建克隆质粒，然后进行酶切鉴定并测定序列，结果表明成功获得目的基因。将目的基因分别与pHT315载体连接，然后将表达质粒分别转入到大肠杆菌BL21和苏云金芽孢杆菌无晶体突变株内，使用IPTG诱导目的蛋白表达。生物测定结果表明Cry4Aa、Cry4Ba蛋白对淡色库蚊幼虫的致死率基本相同。但Cry4Aa、Cry4Ba蛋白的致死率要明显低于苏云金芽孢杆菌以色列亚种，这可能是由于苏云金芽孢杆菌以色列亚种菌液中含有多种毒蛋白并且具有协同作用所造成的；Mtx1与球形芽孢杆菌的毒力相当，而Mtx2、Mtx3无毒。
苏天运[9]（2014）在《生物理念杀蚊幼剂的历史与现状及未来》文中研究表明生物理念杀蚊幼剂主要包括微生物杀虫剂、昆虫生长调节剂和植物源杀虫剂。微生物杀虫剂中除了传统的苏云金杆菌以色列亚种（Bacillus thuringiensis israelensis de Bajac,B.t.i.）和球形芽孢杆菌（Bacillus sphaericus Neide）外,近年来刺糖多孢菌（Saccharopolyspora spinosa Mertz and Yao）的研究、开发和应用也取得了长足的进展。就昆虫生长调节剂而言,保幼激素类似物烯虫酯（methoperene）在公共卫生害虫治理上的应用日趋广泛。吡丙醚（pyriproxyfen）作为现今已知的最为有效的生物理念杀蚊幼剂将会越来越受到重视。在几丁质合成抑制剂中,传统的除虫脲（diflubenzuron）和新近开发的氟酰脲（novaluron）将在未来蚊虫控制上起到独特的作用。基于苦楝素（azadirachtin）的植物杀虫剂可望从印度及其他国家的村落文化走向现代化的害虫综合治理。生物理念杀虫剂因其具有相对靶生物特异性以及环境保护价值越来越受到青睐。笔者从学术研究、技术开发及现场应用的角度简短回顾了这些杀幼剂的历史、总结和分析了现状,并预测了在中国和其他发展中国家的开发应用前景。
马素媛[10]（2013）在《苏云金杆菌以色列种对云南省中缅边境地区三带喙库蚊杀伤效果评价》文中研究说明研究背景和目的：三带喙库蚊是流行性乙型脑炎的重要传播媒介，除携带乙型脑炎病毒外，还可携带基孔肯雅病毒、版纳病毒、Kadipiro病毒、环状病毒、西尼罗河病毒等[1]。我国是乙脑高流行区，在20世纪60年代和70年代初期全国曾发生大流行，70年代以后随着大范围接种乙脑疫苗，乙脑发病率明显下降，据我国1998-2002年乙脑监测数据显示该病的病死率高达5%-35%，幸存病例中30%-50%将留有严重的后遗症[2]。云南省2007年开始实施乙脑疫苗国家免疫规划，流行强度得到一定程度遏制，2008-2009年的病死率仍然维持在较高水平（5.90%和3.79%），说明流行态势依然严峻，因此还应做好蚊情监测及防控[3]。消灭三带喙库蚊目前应用较为广泛的是对成虫使用化学杀虫剂。但长期大量使用化学杀虫剂，导致我国多地的三带喙库蚊对敌敌畏、溴氰菊酯等化学杀虫剂已达到高抗水平，对其它常用化学杀虫剂部分也产生了部分抗性[4][5][6][7][8]，因此寻找新型无毒、无污染的杀虫剂成为媒介生物防治的重要任务。1976年首次发现对蚊虫有很强杀虫活性的苏云金芽孢杆菌以色列亚种（Bacillus thuringiensis israelensis, Bti）具有对靶生物高度特异、对人畜无毒、不污染环境、不伤害天敌、害虫不易产生抗药性、防治成本比化学农药低、工艺简便和易于生产使用等特点，具有较好的应用和开发前景[1]。云南省德宏州盈江县地处我国西南边陲，与缅甸交界，县城附近地势平坦，四面环山，是大山深处的“平原”。该地以种植水稻和甘蔗等为主，气候温热潮湿，稻田和耕牛饲养等都为蚊虫滋生创造了较好的环境，在该地区蚊虫分布密度非常大，其中绝大部分是三带喙库蚊。2008年、2009年盈江县乙脑的发病率居云南省前五位[2]。本课题组的前期研究结果提示，云南省德宏州盈江县太平镇的三带喙库蚊对溴氰菊酯已产生非常高的抗药性，因此，寻找新型杀虫剂已成为该地区蚊媒防治当前亟待解决的重要问题。本课题组在云南省中缅边境地区德宏州盈江县太平镇的稻田茬地积水捕捉三带喙库蚊幼虫，带回实验室，对Bti杀伤三带喙库蚊幼虫的效果进行生物测定，并探讨在不同蚊龄、温度、水质、密度条件下Bti对三带喙库蚊幼虫杀伤效果及Bti处理对蛹羽化率的影响，旨在为Bti在杀灭三带喙库蚊中的合理应用提供科学依据。方法：首先利用概率分析方法对Bti水分散颗粒剂作用于三带喙库蚊不同蚊龄幼虫的杀伤效果进行生物测定，然后检测和比较在不同温度、水质、密度下Bti对三带喙库蚊幼虫的杀伤效果，明确不同蚊龄、温度、水质、密度对Bti灭蚊效果的影响；并对比观察了亚致死量Bti处理后对三带喙库蚊幼虫化蛹后羽化率的影响。结果：1. Bti对三带喙库蚊幼虫的灭杀起效快，12h内即显示很强的杀伤效果。2. Bti对Ⅱ龄、Ⅳ龄蚊幼虫进行杀伤处理后24h，利用GraphPad Prism软件进行线性回归分析，药物浓度的log值和死亡率的概率值具有线性关系，得到公式y=2.588x-0.2524、y=2.03x+0.3654，LC50分别为107IU/L、192IU/L，LC95分别为465IU/L、9091IU/L。Ⅳ龄幼虫LC95是Ⅱ龄幼虫LC95的19.55倍，提示Ⅱ龄幼虫对Bti更为敏感。3. Bti对井水、稻田水中蚊幼虫杀伤效果进行生物测定，得到公式为y井水=2.03x+0.3654、y稻田水=1.115x+1.306，根据该公式计算LC50分别为192IU/L、2056IU/L，LC95分别为9091IU/L、62348IU/L，提示Bti在井水中比稻田重杀伤蚊虫的效果更好。4.在16℃、28℃、37℃三个不同温度下，加入Bti处理后6h、12h和24h，计算幼虫的累积死亡率。结果显示，在同一处理时间点，温度越高，幼虫死亡率也越高（P<0.01）。在Bti处理幼虫12h和24h，28℃和37℃的幼虫累积死亡率组间差异无统计学意义（P>0.05），但均显着高于16℃的幼虫累积死亡率（P<0.01）。5.不同密度下的三带喙库蚊Ⅲ龄幼虫，显示无论Bti低剂量组或高剂量组随着幼虫密度的增加，Bti对幼虫的杀伤效果在不断降低。高剂量组的杀伤效果随着幼虫密度的增加成直线下降，低剂量组在幼虫120条/L后杀伤效果就不明显。6.未用Bti处理的幼虫化蛹后羽化率为72.46%，用亚致死浓度处理的幼虫化蛹后羽化率为45.15%，两组间比较差异有统计学意义（P<0.01），提示Bti对三带喙库蚊幼虫化蛹后的羽化有明显抑制作用。结论：Bti对云南省中缅边境地区德宏州盈江县太平镇的稻田茬地积水捕捉三带喙库蚊幼虫的杀伤作用较为敏感；一定范围内升高温度可以提高Bti的起效速度和杀伤效果；蚊龄越小杀伤效果越好；水质混浊、密度高的地方需增加用药量；Bti可使幼虫化蛹后的羽化率降低。本研究结果提示，Bti是三带喙库蚊防治的理想生物杀虫剂。
二、球形芽孢杆菌和苏云金芽孢杆菌以色列亚种杀蚊毒素间的协同作用（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、球形芽孢杆菌和苏云金芽孢杆菌以色列亚种杀蚊毒素间的协同作用（论文提纲范文）
（1）苏云金芽孢杆菌杀蚊菌株研究进展（论文提纲范文）
| 1 Bti及其特异双翅目毒蛋白 |
| 2其他Bt杀蚊菌株 |
| 3 Bt杀蚊毒蛋白 |
| 4 Cry/Cyt毒蛋白的杀蚊作用模式 |
| 5总结与展望 |
（2）苏云金芽孢杆菌内毒素CryIVD重组表达及灭蝇效果评估（论文提纲范文）
| 致谢 |
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 中英文符号表 |
| 文献综述 |
| 1.1 家蝇的特征及防治现状 |
| 1.1.1 家蝇的形态特征 |
| 1.1.2 家蝇的生物学特性 |
| 1.2 家蝇的危害及其防治 |
| 1.2.1 家蝇的主要危害 |
| 1.2.2 家蝇的防治现状 |
| 1.3 苏云金芽孢杆菌及其应用研究进展 |
| 1.3.1 Cry蛋白的生物学特性 |
| 1.3.2 Cry蛋白的作用机理 |
| 1.3.3 Cry蛋白的研究进展 |
| 1 引言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 菌株和载体 |
| 2.2 试验家蝇 |
| 2.3 培养基和试剂 |
| 2.4 实验仪器 |
| 2.5 苏云金芽孢杆菌质粒的提取 |
| 2.6 核酸琼脂糖凝胶电泳分析 |
| 2.7 大肠杆菌(DH5α)感受态的制备 |
| 2.8 目的基因的克隆 |
| 2.8.1 目的基因引物设计 |
| 2.8.2 CryIVD基因PCR扩增 |
| 2.9 CryIVD基因PCR产物胶回收 |
| 2.10 构建克隆载体pMD-19-T-CryIVD |
| 2.11 PCR鉴定pMD-19-T-CryIVD克隆 |
| 2.12 重组质粒pMD-19-T-CryIVD的提取 |
| 2.13 重组质粒pMD-19-T-CryIVD双酶切与产物的纯化 |
| 2.14 pGEX-4T-1-CryIVD原核表达载体的构建 |
| 2.15 PCR鉴定重组质粒pGEX-4T-1-CryIVD |
| 2.16 CryIVD基因的原核表达 |
| 2.17 SDS-PAGE分析重组蛋白的表达情况 |
| 2.17.1 SDS-PAGE检测 |
| 2.17.2 制胶和上样 |
| 2.17.3 电泳 |
| 2.17.4 染色和脱色 |
| 2.18 Western-blot鉴定重组蛋白 |
| 2.18.1 SDS-PAGE阶段 |
| 2.18.2 电转移阶段 |
| 2.18.3 免疫应答及显色反应 |
| 2.19 CryIVD杀虫蛋白杀蝇毒效观察 |
| 2.19.1 CryIVD杀虫蛋白对蝇卵毒效的初步观察 |
| 2.19.2 CryIVD杀虫蛋白对蝇卵的毒力测定 |
| 2.19.3 CryIVD杀虫蛋白对家蝇成虫的毒力测定 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 目的基因的PCR扩增 |
| 3.2 克隆载体pMD-19-T-CryIVD的PCR鉴定 |
| 3.3 克隆载体的酶切鉴定 |
| 3.4 CryIVD基因的测序结果 |
| 3.5 基因进化树结果 |
| 3.6 重组质粒表达载体pGEX-4T-1-CryIVD的鉴定 |
| 3.7 CryIVD基因的原核表达 |
| 3.8 免疫印迹结果 |
| 3.9 CryIVD杀虫蛋白杀蝇毒效观察 |
| 3.9.1 杀虫蛋白对蝇卵毒效的初步观察结果 |
| 3.9.2 蝇卵急性毒理试验结果 |
| 3.9.3 家蝇成虫急性毒理试验结果 |
| 4 讨论 |
| 4.1 苏云金杆菌作为新型杀虫剂研制与应用 |
| 4.2 CryIVD基因表达与利用 |
| 5 结论 |
| 参考文献 |
| 作者简介 |
（3）杀致倦库蚊幼虫芽孢杆菌的分离与功效研究（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.1.1 培养基 |
| 1.1.2 供试蚊虫 |
| 1.2 土样采集 |
| 1.3 菌株分离 |
| 1.4 生物测定 |
| 1.5 光学显微镜观察 |
| 1.6 利用16S rDNA对菌株分类鉴定 |
| 1.7 杀蚊菌株蛋白的SDS-PAGE分析 |
| 2 实验结果 |
| 2.1 杀致倦库蚊幼虫芽胞杆菌的分离 |
| 2.2 分离芽孢杆菌对致倦库蚊幼虫的毒力 |
| 2.3 菌株形态观察 |
| 2.4 分离的对致倦库蚊幼虫高毒力菌株的分子鉴定 |
| 2.5 杀蚊菌株晶体蛋白的SDS-PAGE |
| 3 讨论 |
（4）Bt杀虫蛋白原核表达及对异迟眼蕈蚊的杀虫活性（论文提纲范文）
| 摘要 |
| 前言 |
| 1.1 食用菌主要害虫 |
| 1.1.1 食用菌害虫害症状 |
| 1.1.2 眼蕈蚊为害特点 |
| 1.2 食用菌眼蕈蚊的防治 |
| 1.2.1 农业防治 |
| 1.2.2 物理防治 |
| 1.2.3 化学防治 |
| 1.2.4 生物防治 |
| 1.3 苏云金芽孢杆菌概况 |
| 1.3.1 苏云金芽孢杆菌的杀虫活性 |
| 1.3.2 苏云金芽孢杆菌的杀虫机理 |
| 1.4 高效杀虫BT工程菌的构建 |
| 1.4.1 种内改造 |
| 1.4.2 种间改造 |
| 1.5 本研究目的和意义 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 试验材料 |
| 2.1.1 供试昆虫、菌株和质粒 |
| 2.1.2 供试培养基 |
| 2.1.3 供试化学试剂 |
| 2.1.4 供试试剂盒 |
| 2.1.5 供试仪器 |
| 2.2 菌株筛选 |
| 2.2.1 Bt菌株室内毒力测定 |
| 2.2.2 Bt菌株对食用菌菌丝的影响 |
| 2.3 23 -5 菌株鉴定 |
| 2.3.1 形态鉴定 |
| 2.3.2 生理生化鉴定 |
| 2.3.3 16 S rDNA鉴定 |
| 2.4 23 -5 菌株杀虫蛋白基因型PCR-RFLP鉴定 |
| 2.5 23 -5 菌株杀虫蛋白基因克隆载体构建 |
| 2.5.1 杀虫蛋白引物设计与PCR扩增 |
| 2.5.2 杀虫蛋白基因克隆载体构建 |
| 2.5.3 克隆载体的酶切验证 |
| 2.6 23 -5 菌株杀虫蛋白的生物信息学分析 |
| 2.7 23 -5 菌株杀虫蛋白基因表达载体构建 |
| 2.7.1 载体双酶切及目的片段回收 |
| 2.7.2 目的片段与表达载体连接 |
| 2.7.3 表达载体的双酶切验证 |
| 2.8 23-5 菌株杀虫蛋白表达载体的表达及纯化 |
| 2.8.1 杀虫蛋白表达载体诱导表达 |
| 2.8.2 包涵体蛋白的复变性 |
| 2.8.3 融合蛋白的Ni柱亲和纯化 |
| 2.8.4 Western Blot |
| 2.9 目标蛋白工程菌室内毒力测定 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 菌株筛选 |
| 3.1.1 室内毒力测定 |
| 3.1.2 菌株对食用菌菌丝的影响 |
| 3.2 23-5 菌株鉴定 |
| 3.2.1 形态鉴定 |
| 3.2.2 生理生化鉴定 |
| 3.2.3 16S rDNA鉴定 |
| 3.3 23-5 菌株杀虫蛋白基因型鉴定 |
| 3.4 23-5 菌株杀虫蛋白基因克隆载体构建 |
| 3.4.1 PCR扩增结果 |
| 3.4.2 杀虫蛋白基因的克隆 |
| 3.5 23-5 菌株杀虫蛋白的生物信息学分析 |
| 3.6 2-5 菌株杀虫蛋白基因表达载体构建 |
| 3.6.1 杀虫蛋白基因表达载体构建 |
| 3.6.2 表达载体的酶切验证 |
| 3.7 23-5 菌株杀虫蛋白表达载体的表达及纯化 |
| 3.7.1 杀虫蛋白表达载体诱导表达 |
| 3.7.2 融合蛋白的Ni柱亲和纯化结果 |
| 3.8 目标蛋白工程菌室内毒力测定 |
| 4 讨论 |
| 4.1 食用菌眼蕈蚊的防治 |
| 4.2 BT菌株杀虫蛋白基因型 |
| 4.3 杀虫蛋白原核表达的特点 |
| 4.4 杀虫蛋白应用研究 |
| 4.5 23-5 菌株的应用前景 |
| 5 结论 |
| 参考文献 |
| ABSTRACT |
| 攻读学位期间取得成果 |
| 致谢 |
| 附录1 |
| 附录2 |
（5）不同添加物对苏云金芽孢杆菌杀虫活性的增效作用研究进展（论文提纲范文）
| 1 化学添加剂对苏云金芽孢杆菌杀虫活性的增效作用 |
| 2 化学杀虫剂对苏云金芽孢杆菌杀虫活性的增效作用 |
| 3 生物杀虫剂对苏云金芽孢杆菌杀虫活性的增效作用 |
| 3.1 苏云金芽孢杆菌毒素间的增效作用 |
| 3.2 其他病原微生物对苏云金芽孢杆菌杀虫活性的增效作用 |
| 3.3 其他生物杀虫剂对苏云金芽孢杆菌杀虫活性的增效作用 |
| 4 其他添加物对苏云金芽孢杆菌杀虫活性的增效作用 |
| 5 展望 |
（6）Mtx1和Cry4Ba毒蛋白基因工程研究进展（论文提纲范文）
| 1 球形芽孢杆菌Mtx1研究 |
| 1.1 Mtx1简介 |
| 1.2 Mtx1基因工程研究 |
| 2 Cry4Ba研究 |
| 2.1 Cry4Ba作用机理和结构 |
| 2.2 Cry4Ba基因工程研究 |
| 3 问题与思考 |
（7）蚊虫对微生物和昆虫生长调节剂杀幼剂的抗药性及其管理（论文提纲范文）
| 1 微生物杀虫剂 |
| 1.1 苏云金杆菌以色列变种(Bacillus thuringiensis israelensis de Bajac,B.t.i.) |
| 1.1.1 细菌、毒素及作用原理 |
| 1.1.2 抗药性发展 |
| 1.1.3 抗药性管理 |
| 1.2 球形芽孢杆菌(Lysinibacillus sphaericus Meyer和Neide,过去称为Bacillus sphaericus Neide) |
| 1.2.1 细菌、毒素及作用原理 |
| 1.2.2 抗药性发展 |
| 1.2.3 抗药性管理 |
| 1.3 刺糖多孢菌(Saccharopolyspora spinosa) |
| 1.3.1 细菌、毒素及作用原理 |
| 1.3.2 抗药性发展 |
| 1.3.3 抗药性管理 |
| 2 昆虫生长调节剂 |
| 2.1 烯虫酯(methoperene)和吡丙醚(pyriproxyfen) |
| 2.1.1 成分及作用原理 |
| 2.1.2 抗药性发展 |
| 2.1.3 抗药性管理 |
| 2.2 除虫脲(diflubenzuron) |
| 2.2.1 成分及作用原理 |
| 2.2.2 抗药性发展 |
| 2.2.3 抗药性管理 |
| 3 总结与展望 |
（8）苏云金芽孢杆菌和球形芽孢杆菌主要杀蚊毒蛋白的克隆及表达（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 1 前言 |
| 1.1 苏云金芽孢杆菌简介 |
| 1.1.1 Cyt 蛋白 |
| 1.1.1.1 Cyt 蛋白种类与特性 |
| 1.1.1.2 Cyt 蛋白的结构 |
| 1.1.1.3 Cyt 蛋白的作用机制 |
| 1.1.1.4 Cyt 蛋白的研究进展 |
| 1.1.2 Cry 蛋白 |
| 1.1.2.1 Cry 蛋白简介 |
| 1.1.2.2 Cry 蛋白的结构 |
| 1.1.2.3 Cry 蛋白的作用机制 |
| 1.1.2.4 Cry 蛋白的研究进展 |
| 1.2 球形芽孢杆菌概述 |
| 1.2.1 Bin 毒素 |
| 1.2.1.1 Bin 毒素性质 |
| 1.2.1.2 Bin 毒素作用机理 |
| 1.2.1.3 Bin 毒素研究进展 |
| 1.2.2 Mtx1 杀蚊毒蛋白 |
| 1.2.2.1 Mtx1 杀蚊毒蛋白作用机理 |
| 1.2.2.2 Mtx1 研究进展 |
| 1.2.2.3 Mtx2 和 Mtx3 简介 |
| 1.3 本研究的目的意义 |
| 2 实验材料与方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 菌株和载体 |
| 2.1.2 供试蚊幼虫 |
| 2.1.3 培养基和试剂 |
| 2.1.3.1 培养基 |
| 2.1.3.2 试剂 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 苏云金芽孢杆菌质粒的提取 |
| 2.2.2 球形芽孢杆菌基因组的提取 |
| 2.2.3 核酸琼脂糖凝胶电泳分析 |
| 2.2.4 大肠杆菌（DH5α）感受态的制备 |
| 2.2.5 目的基因的克隆 |
| 2.2.5.1 目的基因引物设计 |
| 2.2.5.2 高保真酶 PCR 扩增 |
| 2.2.6 PCR 扩增产物的回收 |
| 2.2.7 克隆载体的构建 |
| 2.2.8 大肠杆菌质粒的提取 |
| 2.2.9 克隆质粒的酶切鉴定 |
| 2.2.10 测序 |
| 2.2.11 Cry4Aa、Cry4Ba、Mtx1、Mtx2 、Mtx3 基因穿梭载体的构建 |
| 2.2.12 Cry-BT 感受态细胞的制备 |
| 2.2.13 表达菌的制备 |
| 2.2.14 表达质粒的酶切鉴定 |
| 2.2.15 表达菌的诱导表达 |
| 2.2.16 表达蛋白的的 SDS-PAGE 检测 |
| 2.2.16.1 准备工作 |
| 2.2.16.2 配制凝胶 |
| 2.2.16.3 5%浓缩胶的配置 |
| 2.2.16.4 样品处理与加样 |
| 2.2.16.5 电泳 |
| 2.2.16.6 染色和脱色 |
| 2.2.17 不同毒蛋白对蚊幼致死率测定 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 目的基因的克隆与序列分析 |
| 3.1.1 苏云金芽孢杆菌、球形芽孢杆菌 DNA 的提取 |
| 3.1.2 目的基因的克隆及序列分析 |
| 3.1.3 测序分析 |
| 3.2 目的基因的原核表达 |
| 3.2.1 原核表达载体的构建 |
| 3.2.2 原核表达载体的双酶切鉴定 |
| 3.2.3 诱导目的蛋白表达 |
| 3.3 不同毒蛋白对蚊幼致死率的测定 |
| 4 结论与讨论 |
| 4.1 结论 |
| 4.2 实验中出现的问题与分析 |
| 4.3 克隆基因表达蛋白的功能性分析 |
| 4.4 本实验下一步工作 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（9）生物理念杀蚊幼剂的历史与现状及未来（论文提纲范文）
| 1微生物杀虫剂 |
| 2昆虫生长调节剂 |
| 2. 1保幼激素类似物- 烯虫酯( methoperene) 和吡丙醚( pyriproxyfen) |
| 2. 2几丁质合成抑制剂- 除虫脲( diflubenzuron) 和氟酰脲( novaluron) |
| 3植物源杀虫剂- 苦楝素( azadirachtin) |
| 4展望 |
（10）苏云金杆菌以色列种对云南省中缅边境地区三带喙库蚊杀伤效果评价（论文提纲范文）
| 缩略语表 |
| Abstract |
| 摘要 |
| 第一章 前言 |
| 第二章 材料与方法 |
| 2.1 材料 |
| 2.2 方法 |
| 2.3 质量控制 |
| 2.4 数据处理 |
| 第三章 结果 |
| 3.1 Bti 对三带喙库蚊幼虫的杀伤效果 |
| 3.2 Bti 对不同蚊龄三带喙库蚊幼虫的杀伤效果 |
| 3.3 不同水质下 Bti 对三带喙库蚊幼虫的杀伤效果 |
| 3.4 Bti 在不同温度下对三带喙库蚊幼虫的杀伤效果 |
| 3.5 Bti 对三带喙库蚊不同密度下幼虫的杀伤效果 |
| 3.6 Bti 对三带喙库蚊处理后蛹的羽化率 |
| 第四章 讨论 |
| 4.1 化学杀虫剂对三带喙库蚊杀灭作用存在的问题 |
| 4.2 生物杀虫剂的类型及应用情况 |
| 4.3 Bit 对云南省德宏州盈江县太平镇三带喙库蚊的杀伤作用 |
| 4.4 本研究不足之处 |
| 全文结论 |
| 参考文献 |
| 文献综述 |
| 参考文献 |
| 攻读硕士学位期间撰写和发表文章 |
| 致谢 |
四、球形芽孢杆菌和苏云金芽孢杆菌以色列亚种杀蚊毒素间的协同作用（论文参考文献）
- [1]苏云金芽孢杆菌杀蚊菌株研究进展[J]. 周燕,朱英芝,姜明国. 基因组学与应用生物学, 2020(10)
- [2]苏云金芽孢杆菌内毒素CryIVD重组表达及灭蝇效果评估[D]. 孔浩然. 安徽农业大学, 2020(04)
- [3]杀致倦库蚊幼虫芽孢杆菌的分离与功效研究[J]. 高元,丁露,郭青云,谭小敏,谢青华,王子卓,戴小华. 赣南师范大学学报, 2020(03)
- [4]Bt杀虫蛋白原核表达及对异迟眼蕈蚊的杀虫活性[D]. 王帆帆. 山西农业大学, 2019(07)
- [5]不同添加物对苏云金芽孢杆菌杀虫活性的增效作用研究进展[J]. 李超峰. 生物技术进展, 2018(02)
- [6]Mtx1和Cry4Ba毒蛋白基因工程研究进展[J]. 孙强,杨丽丽. 黑龙江八一农垦大学学报, 2014(03)
- [7]蚊虫对微生物和昆虫生长调节剂杀幼剂的抗药性及其管理[J]. 苏天运. 中国媒介生物学及控制杂志, 2014(03)
- [8]苏云金芽孢杆菌和球形芽孢杆菌主要杀蚊毒蛋白的克隆及表达[D]. 杨丽丽. 黑龙江八一农垦大学, 2014(08)
- [9]生物理念杀蚊幼剂的历史与现状及未来[J]. 苏天运. 中华卫生杀虫药械, 2014(01)
- [10]苏云金杆菌以色列种对云南省中缅边境地区三带喙库蚊杀伤效果评价[D]. 马素媛. 第三军医大学, 2013(05)